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farkll

新虫 (初入文坛)

[求助] 我的聚丙烯酰胺胶银染为什么条带是黄色的？

各位大神，求助，我做聚丙烯酰胺凝胶电泳，印染后的条带为什么是黄色的，不清晰，很难和背景分开？我看其他人做出来的银染条带都是黑色的。
我做的是SSR，银染步骤：
1.10%醋酸固定30min
2.蒸馏水洗10min
3.AgNo3 2g， 3ml甲醛，2L H2O 染色30min
4.蒸馏水洗5S
5.Na2CO3 60g，3ml甲醛，2L H2O配成显影液，-20℃预冷，显影至条带清晰
6.10%醋酸固定，水洗各3min
请问问题出在哪里，为什么我染得条带是黄色的，不清晰？

primer64,67,75,88,105.JPG
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1楼 2012-10-22 11:34:50
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readingbent

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这是弱碱法染色的。你可以尝试强碱法，会达到你想要的黑色效果的
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无语中。。。。。。。。。。。。
2楼2012-10-24 15:14:11
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低色调

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2012-10-24 15:23:04
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Benyao

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

第三步骤中你再加入10mg/μL的硫代硫酸钠280μL试试看。
赞一下 回复此楼
I will try my best!
4楼2012-11-03 15:42:56
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shucanwei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我现在也在做这个，我做aflp，银染程序和你差不多，建议在显影时加十毫克每毫升的硫代硫酸钠四百微升。且显影液分两次用，每次一升，等一次到出现条带时就倒掉，换新的一升。希望对你有帮助。我做出来的条也是黄色的。如果显影太久就会相对较黑。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
5楼2012-11-03 19:11:27
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manli881107

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我用的方法和你不太一样
1.用清水洗几秒
2.银染10分钟：1L水+1g AgNO3
3.清水中快速洗几下
4.显影至出现明显条带：16g NaOH+1L水
5.定影几十秒：6g NaCO3+1L水
6.水洗两分钟
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6楼2012-12-20 15:46:24
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凉凉鱼

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

蒸馏水洗的时间太长了，所以条带和背景颜色都很浅。减少时间就好了。
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7楼2012-12-20 16:25:31
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