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farkll

新虫 (初入文坛)

[求助] 我的聚丙烯酰胺胶银染为什么条带是黄色的?

各位大神,求助,我做聚丙烯酰胺凝胶电泳,印染后的条带为什么是黄色的,不清晰,很难和背景分开?我看其他人做出来的银染条带都是黑色的。
我做的是SSR,银染步骤:
1.10%醋酸固定30min
2.蒸馏水洗10min
3.AgNo3 2g, 3ml甲醛,2L H2O 染色30min
4.蒸馏水洗5S
5.Na2CO3 60g,3ml甲醛,2L H2O配成显影液,-20℃预冷,显影至条带清晰
6.10%醋酸固定,水洗各3min
请问问题出在哪里,为什么我染得条带是黄色的,不清晰?

primer64,67,75,88,105.JPG
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shucanwei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我现在也在做这个,我做aflp,银染程序和你差不多,建议在显影时加十毫克每毫升的硫代硫酸钠四百微升。且显影液分两次用,每次一升,等一次到出现条带时就倒掉,换新的一升。希望对你有帮助。我做出来的条也是黄色的。如果显影太久就会相对较黑。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
唯以一人治天下,不以天下奉一人。
5楼2012-11-03 19:11:27
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readingbent

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这是弱碱法染色的。你可以尝试强碱法,会达到你想要的黑色效果的
无语中。。。。。。。。。。。。
2楼2012-10-24 15:14:11
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低色调

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
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3楼2012-10-24 15:23:04
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Benyao

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

第三步骤中你再加入10mg/μL的硫代硫酸钠280μL试试看。
I will try my best!
4楼2012-11-03 15:42:56
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