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wujiangjie

木虫 (正式写手)

[交流] 如何在丙烯酰胺凝胶中固定天然DNA

各位大虾，我现在用聚丙烯酰胺的多孔材料和天然鱼精DNA物理吸附后，DNA泄露比较严重，我考虑利用AM上的氨基共价修饰DNA，但是那些方法都建立在修饰合成DNA基础上，比如修饰5'端，修饰DNA上的磷酸基团，可是我的是天然DNA，它是混合的，这些方法都不好修饰，请问有没有什么方法可以解决这个问题，让DNA不在泄露呢？谢谢！！！
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1楼 2011-07-12 19:41:01
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beastzq

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wujiangjie(金币+1): 谢谢！ 2011-07-13 20:39:55
引用回帖:
Originally posted by wujiangjie at 2011-07-12 19:41:01:
各位大虾，我现在用聚丙烯酰胺的多孔材料和天然鱼精DNA物理吸附后，DNA泄露比较严重，我考虑利用AM上的氨基共价修饰DNA，但是那些方法都建立在修饰合成DNA基础上，比如修饰5'端，修饰DNA上的磷酸基团，可是我的是 ...

一定要吸附吗？合成PAM的时候就把DNA包埋进去好了
或者合成凝胶的时候加点阳离子单体共聚，可能可以增加吸附量
或者与反应性强的单体（如烯丙基缩水甘油醚等）共聚，再共价固定DNA
AM上的氨基是酰胺，一般情况下很稳定，反应性不好的
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3楼2011-07-13 19:46:51
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wujiangjie

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by beastzq at 2011-07-13 19:46:51:
一定要吸附吗？合成PAM的时候就把DNA包埋进去好了
或者合成凝胶的时候加点阳离子单体共聚，可能可以增加吸附量
或者与反应性强的单体（如烯丙基缩水甘油醚等）共聚，再共价固定DNA
AM上的氨基是酰胺，一般情 ...

谢谢你的回复！我就是合成ＰＡＭ包埋的，但是不行，过段时间后泄露了。我的ＤＮＡ是天然混合的，不好修饰，所以共价不行。另外关于合成凝胶时加点阳离子单体共聚，请问你能具体给几个例子吗，常见的，便宜的？还有这个会影响凝胶成胶吗？会不会不能成胶呢？谢谢！！！
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4楼2011-07-13 20:43:03
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beastzq

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wujiangjie(金币+1): 谢谢！ 2011-07-14 09:08:07
引用回帖:
Originally posted by wujiangjie at 2011-07-13 20:43:03:
谢谢你的回复！我就是合成ＰＡＭ包埋的，但是不行，过段时间后泄露了。我的ＤＮＡ是天然混合的，不好修饰，所以共价不行。另外关于合成凝胶时加点阳离子单体共聚，请问你能具体给几个例子吗，常见的，便宜的？ ...

你DNA的分子量是多大的？一般几千到几万的聚合物都很容易固定的啊
如果包埋不了，交联剂多加点也可以。
你的凝胶是多孔的？用什么方法做的多孔凝胶呢？
阳离子单体可以是二甲基二烯丙基氯化铵等季铵盐单体，和AM共聚没问题的，
如果是带胍基的，应该吸附效果会很好，但是单体要自己合成，我也没试过，不过文献很多的。
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5楼2011-07-13 21:36:41
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wujiangjie

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by beastzq at 2011-07-13 21:36:41:
你DNA的分子量是多大的？一般几千到几万的聚合物都很容易固定的啊
如果包埋不了，交联剂多加点也可以。
你的凝胶是多孔的？用什么方法做的多孔凝胶呢？
阳离子单体可以是二甲基二烯丙基氯化铵等季铵盐单体， ...

谢谢你的回复！我那个DNA是几十个碱基到几百个碱基的都有，我那个胶是25%的，应该比较密了吧，凝胶应该是多孔的吧，要不也不能用这个凝胶跑电泳什么的吧？我觉得应该是有孔道的，并且可以把DNA吸在里面的，但是这个吸附也就是正电荷和负的磷酸骨架静电作用不强的话，那么DNA就漏了。另外请问这个阳离子单体都是文献里报道过的吗？因为这个都好贵啊，我想先买便宜的试试共聚后效果如何，请问有什么阳离子单体既便宜，又可以达到增大正电荷密度的效果，文献里有报道吗？谢谢！！！
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6楼2011-07-14 09:13:11
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