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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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coal@live.cn

新虫 (小有名气)

[求助] 4%PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)250bp处条带出现扭曲,求助!

如图,我用的是4%非变性聚丙烯酰胺凝胶,跑的是SRAP-PCR程序,两张图的marker都是DL2000,两张图里DL2000的100bp条带均已跑出,故扭曲/压缩处对应的分子量是250bp。
请问这种统一而有规律的条带扭曲是怎么形成的,如何避免?

SRAP01



SRAP02
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-07 15:41:10
coal@live.cn: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 正解啊! 2012-08-09 22:10:53
跑时溴酚蓝成一条很浓的直线,没有分开。
电压低点,还有把你用的溴酚蓝换啦,重新配。
低调稳重务实内敛---------------残
3楼2012-08-07 10:02:45
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
coal@live.cn: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢啦! 2012-08-09 22:11:18
溴酚蓝可能已经过期了,重新配一下看看。
蓝精灵
7楼2012-08-07 20:17:21
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coal@live.cn

新虫 (小有名气)

最近试了下6%的非变性胶(1L用的是4%),发现扭曲线(即在该直线上所有泳道统一发生扭曲和压缩,由图可见)转移到了100bp左右。

现在我也开始怀疑这个现象是溴酚兰(其中的蔗糖)导致的,因为4%的胶中扭曲出现在250bp,而6%的胶中出现在100bp,跟溴酚兰的浓胶中的等效片段小于稀胶这个现象相一致。

不知各位还有什么高见,这个问题又该如何解决?

6%非变性胶,SRAP

15楼2012-08-08 20:29:57
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普通回帖

霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是胶有问题啊
事实证明,除了你自己,不要指望任何一个人
2楼2012-08-06 20:43:06
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wq123good

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-07 15:41:19
有低电压慢慢跑,底部的溴酚蓝是你自己切下去的吧,要等它自己从胶中跑出来
胶的底部气泡是否排出干净,这个很重要
过好每一天
4楼2012-08-07 11:25:58
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q307078056

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-08 14:18:40
1、请更换你的缓冲液,缓冲液浓度不均匀会引起电场不稳,很容易导致胶边缘的核酸出现变形

2、核酸的定性要做好,时间做足··

3、灌胶应一次成型,避免漏胶跟二次补胶。

4、TEMED别过量
人生不是一种享受,而是一桩沉重异常的工作
5楼2012-08-07 16:33:54
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-08 14:18:53
1,调低电泳电压。
2,电泳前确保胶下部没有气泡。
3,夹夹子时两面过紧或过松也容易出现类似现象。
此外,楼主PCR条件还需要调整,你的整个泳道几乎都是SMEAR.
6楼2012-08-07 19:18:48
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coal@live.cn

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 霹雳光 at 2012-08-06 20:43:06
是不是胶有问题啊

没有问题,上面就跑的很正常。
8楼2012-08-08 19:22:06
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coal@live.cn

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wu_shiyong at 2012-08-07 10:02:45
跑时溴酚蓝成一条很浓的直线,没有分开。
电压低点,还有把你用的溴酚蓝换啦,重新配。

嗯,我用的是自配的loading buffer(0.25%溴酚兰,40%蔗糖),上样前每份样品添加1/2体积的loading buffer,跑电泳时溴酚兰的确是呈一条直线(有些粗而淡),但这不是很正常吗?

溴酚兰是这周刚配的,但是没过滤。
9楼2012-08-08 19:35:24
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coal@live.cn

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wq123good at 2012-08-07 11:25:58
有低电压慢慢跑,底部的溴酚蓝是你自己切下去的吧,要等它自己从胶中跑出来
胶的底部气泡是否排出干净,这个很重要

溴酚兰是跑出的。玻璃板下面的缺失部分是用来封胶(封槽子)的琼脂糖,显影前我就剥掉了。

胶的底部无气泡,由图可见。
10楼2012-08-08 19:45:13
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