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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于丙烯酰胺凝胶电泳跑DNA样品的几个问题
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shuangzi8761

银虫 (著名写手)

[交流] 关于丙烯酰胺凝胶电泳跑DNA样品的几个问题

小弟最近做OVERLAP pcr，有几个片段大小为200-300bp，用1%琼脂糖电泳跑胶，发现有不少非特异性带，大小与目的带相差不到100bp，在胶上难以区分，因为还要回收片段，于是想用PAGE胶电泳。
这里几个问题，想请教大家：
1.PAGE胶的浓度和电压，多少为好？
2.maker用是不是用的还是琼脂糖电泳的MAKER, 是的话 上样量多少？
3.用PAGE电泳跑DNA，如何做回收？？
4.如果不用page，采用琼脂糖电泳，提高做胶的浓度到2%，电压还是用原来跑1%的电压和时间吗？如果不是，如何改进？
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1楼2012-11-20 21:27:20
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
shuangzi8761(金币+1): 谢谢参与
建议还是用琼脂糖凝胶电泳吧，PAGE上样量太小，回收产物少，你的情况可以将琼脂糖浓度提高到2%-3%，延长电泳时间，完全可以将你的片段分开，电泳时的电压取决于电极之间的距离，一般5-7v/cm，所以电压不用提高。
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2楼2012-11-21 01:59:01
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fungi_lwh

金虫 (著名写手)
★
shuangzi8761(金币+1): 谢谢参与
建议还是用琼脂糖凝胶电泳，加大胶的浓度，延长电泳时间

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2012-11-21 07:18:35
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gdj363702043

金虫 (正式写手)
★
shuangzi8761(金币+1): 谢谢参与
这种个情况都是用琼脂糖啊
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4楼2012-11-21 09:49:27
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shuangzi8761

银虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2012-11-21 01:59:01
建议还是用琼脂糖凝胶电泳吧，PAGE上样量太小，回收产物少，你的情况可以将琼脂糖浓度提高到2%-3%，延长电泳时间，完全可以将你的片段分开，电泳时的电压取决于电极之间的距离，一般5-7v/cm，所以电压不用提高。

好 多谢 我试试
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5楼2012-11-21 10:49:17
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shuangzi8761

银虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fungi_lwh at 2012-11-21 07:18:35
建议还是用琼脂糖凝胶电泳，加大胶的浓度，延长电泳时间

好 多谢 哥们 咱俩专业一样的啊
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6楼2012-11-21 10:49:34
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jl860822

金虫 (正式写手)
★
shuangzi8761(金币+1): 谢谢参与
1%的胶的话，分离这么小的片段还是有点困难的，2%的吧
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7楼2012-11-21 12:09:41
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
shuangzi8761(金币+1): 谢谢参与
赞成加大凝胶浓度到2-3%，延长电泳时间。由于电泳时间长，所以可能会使缓冲液升温，最好换用新的便用buffer。
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8楼2012-11-21 14:38:05
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极交流经验 2012-11-21 17:28:38
1.PAGE胶的浓度和电压，多少为好？
100V左右，普通蛋白电泳槽，不清纯具体尺寸了，但是是用TBE buffer，可以跑两个小时，100bp大概在PAGE中间
2.maker用是不是用的还是琼脂糖电泳的MAKER, 是的话 上样量多少？
maker可以继续使用，最好用100bp ladder 那种
3.用PAGE电泳跑DNA，如何做回收？？
我以前是切下来，跑横向电泳回收，估计也可以用TE重溶（我自己没做过）
4.如果不用page，采用琼脂糖电泳，提高做胶的浓度到2%，电压还是用原来跑1%的电压和时间吗？如果不是，如何改进？
这个问题上面已经回答过了
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9楼2012-11-21 15:23:38
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Sarainana

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by shuangzi8761 at 2012-11-21 10:49:17
好 多谢 我试试...

你好，我在做的DNA只有20-100bp，琼脂糖浓度有什么建议吗
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10楼2015-12-22 20:18:34
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