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shuangzi8761

银虫 (著名写手)


[交流] 关于丙烯酰胺凝胶电泳跑DNA样品的几个问题

小弟最近做OVERLAP pcr,有几个片段大小为200-300bp,用1%琼脂糖电泳跑胶,发现有不少非特异性带,大小与目的带相差不到100bp,在胶上难以区分,因为还要回收片段,于是想用PAGE胶电泳。
这里几个问题,想请教大家:
1.PAGE胶的浓度和电压,多少为好?
2.maker用是不是用的还是琼脂糖电泳的MAKER, 是的话 上样量多少?
3.用PAGE电泳跑DNA,如何做回收??
4.如果不用page,采用琼脂糖电泳,提高做胶的浓度到2%,电压还是用原来跑1%的电压和时间吗?如果不是,如何改进?
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jl860822

金虫 (正式写手)



shuangzi8761(金币+1): 谢谢参与
1%的胶的话,分离这么小的片段还是有点困难的,2%的吧
7楼2012-11-21 12:09:41
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)



shuangzi8761(金币+1): 谢谢参与
建议还是用琼脂糖凝胶电泳吧,PAGE上样量太小,回收产物少,你的情况可以将琼脂糖浓度提高到2%-3%,延长电泳时间,完全可以将你的片段分开,电泳时的电压取决于电极之间的距离,一般5-7v/cm,所以电压不用提高。
2楼2012-11-21 01:59:01
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fungi_lwh

金虫 (著名写手)



shuangzi8761(金币+1): 谢谢参与
建议还是用琼脂糖凝胶电泳,加大胶的浓度,延长电泳时间

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2012-11-21 07:18:35
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gdj363702043

金虫 (正式写手)



shuangzi8761(金币+1): 谢谢参与
这种个情况都是用琼脂糖啊
4楼2012-11-21 09:49:27
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