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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 跑电泳的一点小疑问
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pandashu1988

铁虫 (初入文坛)

[求助] 跑电泳的一点小疑问

跑电泳时点样先加buffer还是DNA样本？
师兄说最好是把凝胶放在缓冲液里面点样，有什么好处？

下面是小生酶切DNA后跑电泳的图，先buffer后DNA，从右往左点样的，为什么buffer的带子右边的会比左边的跑的更前呢？还有大神们能看看哪个孔跑的片段更接近300~900bp,还是看不出来？额~
跑电泳的一点小疑问
jh 2013-07-03 19 小时 24 分钟_副本.jpg
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1楼2013-07-03 20:15:08
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pandashu1988

铁虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 1949stone at 2013-07-04 09:42:56
在电泳液加就可以啊 buffer有沉降的作用
cicelyzh  的意见很中肯
你的mark跑的有点问题 但是起码条带跑开了 分离度也行  但是你的酶切样本 说句难听的 一塌糊涂 没有您所谓片段 需要重新设计下试验 慢慢摸索下...

这个图是提取某步甲总DNA之后割胶回收在酶切的。
之前没有割胶回收直接酶切可以看到中间有很亮的条带，但是又去提取的DNA有拖带现象，所以先做了割胶，之后再酶切反而是这个样子。。。所以应该和样本没关系吧，额~
还有请教下，用的酶是TAKARA的SAU3AI， ①说明书上提到的20ul反应体系是1ul酶配1ug的DNA； ②上面的1U活性单位定义是37度50ul体系里将1ug λDNA完全分解的量。 ③到手的管子上标的酶浓度是10U/ul，那么是不是要将酶稀释10倍了再加？
还有我看论坛里都说这个酶的最适浓度是0.01U/ug，这个说明书上的定义岂不是有矛盾，额~
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8楼2013-07-04 14:26:28
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pandashu1988

铁虫 (初入文坛)
用的是2000的MARKER
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2楼2013-07-03 20:16:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-04 02:57:59
我觉得你的问题很怪，电泳上样buffer和样品是要混合起来的，顺序只是方便操作的问题。一般都是先buffer，可以用一个枪头去吸，然后加入样品，因为枪头上带了样品，不能反复使用造成污染。没有缓冲液的样品孔里是空气，首先这对胶不好，容易干掉。其次，点样时如果在缓冲液里样品可以加在液体里会直接沉到样品孔的底部。所有的凝胶电泳都是这样做的。
至于你的电泳图，我觉得胶做得不行或者电泳条件有问题。marker都跑歪了，而且条带不清晰。
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3楼2013-07-03 23:39:15
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pandashu1988

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-03 23:39:15
我觉得你的问题很怪，电泳上样buffer和样品是要混合起来的，顺序只是方便操作的问题。一般都是先buffer，可以用一个枪头去吸，然后加入样品，因为枪头上带了样品，不能反复使用造成污染。没有缓冲液的样品孔里是空气 ...

嗯，多谢解答，嘿嘿~我还想问下，泡成这样看不清，是不是DNA总量也不够，切开了也看不清？
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4楼2013-07-04 08:47:02
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