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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 胶原蛋白的电泳为什么跑不出来？
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黑色月光

铜虫 (小有名气)

[求助] 胶原蛋白的电泳为什么跑不出来？ 已有2人参与

自己从鱼鳞里提了些胶原蛋白，跑了个电泳（SDS-PAGE，考染），但没有条带。其他的蛋白、marker什么的都能跑出来，为什么就这个跑不出来？是不是蛋白浓度太低了？
我后来用较高浓度的蛋白的酶解液（碱性蛋白酶，不完全酶解），也跑不出来，这是为什么啊？？？

[ Last edited by 黑色月光 on 2013-3-1 at 18:59 ]
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1楼 2013-03-01 18:38:56
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hsd3521

主管区长 (知名作家)

火星驻地球联络处主任科员

优秀区长优秀版主优秀版主
请问较高蛋白含量是多少？测过蛋白含量没？
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太胖了！~
2楼2013-03-03 14:54:11
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鎏金

银虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
hsd3521: 应助指数-1, 非有效应助，欢迎继续关注 2013-03-04 17:35:47
上样缓冲液是什么？  加完之后怎么处理的咩？
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我是快乐的小傻子，嘻嘻嘻嘻
3楼2013-03-04 08:19:57
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victory123

木虫 (正式写手)
会不会是分子量太大，形成交联卡在上样口了……
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4楼2013-03-04 20:00:33
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黑色月光

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hsd3521 at 2013-03-03 14:54:11
请问较高蛋白含量是多少？测过蛋白含量没？

没有测含量，但粗略估计了下，30ml溶液中有0.5g左右的处理后的鱼鳞（基本是胶原），酶解后全部溶于溶液中，未见残留物，我已经提到过了，酶解用的是碱性蛋白酶，不可能酶解完全的。
电泳上样量是10微升酶解液，就这种情况下，还是什么条带都没有……
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5楼2013-03-04 21:21:53
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黑色月光

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by victory123 at 2013-03-04 20:00:33
会不会是分子量太大，形成交联卡在上样口了……

我也想过这种情况，但后来用了酶解后的蛋白液上样，这个酶解是不完全的，照说应该有一连串的条带，但还是什么都没有
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6楼2013-03-04 21:24:48
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黑色月光

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鎏金 at 2013-03-04 08:19:57
上样缓冲液是什么？  加完之后怎么处理的咩？

就是基本的那些……然后煮沸
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7楼2013-03-04 21:45:14
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time_729

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果不是分子量太大的问题，建议将样品缓冲液冻干一部分，或者以超滤等方法，提高目的蛋白的浓度后，在进行电泳
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8楼2013-03-04 21:55:48
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120256674

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
hsd3521: 金币+1, 鼓励新虫交流，欢迎常来 2013-03-05 09:48:24
会不会是酶解液ph偏离中性 影响电泳
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9楼2013-03-05 08:43:07
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黑色月光

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 120256674 at 2013-03-05 08:43:07
会不会是酶解液ph偏离中性 影响电泳

不会吧，我测过PH差不多在6左右，这有很大的影响吗？
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10楼2013-03-05 20:36:29
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