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黑色月光

铜虫 (小有名气)

[求助] 胶原蛋白的电泳为什么跑不出来? 已有2人参与

自己从鱼鳞里提了些胶原蛋白,跑了个电泳(SDS-PAGE,考染),但没有条带。其他的蛋白、marker什么的都能跑出来,为什么就这个跑不出来?是不是蛋白浓度太低了?
我后来用较高浓度的蛋白的酶解液(碱性蛋白酶,不完全酶解),也跑不出来,这是为什么啊???

[ Last edited by 黑色月光 on 2013-3-1 at 18:59 ]
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hsd3521

主管区长 (知名作家)

火星驻地球联络处主任科员

优秀区长优秀版主优秀版主

请问较高蛋白含量是多少?测过蛋白含量没?
太胖了!~
2楼2013-03-03 14:54:11
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鎏金

银虫 (初入文坛)

感谢参与,应助指数 +1
hsd3521: 应助指数-1, 非有效应助,欢迎继续关注 2013-03-04 17:35:47
上样缓冲液是什么?  加完之后怎么处理的咩?
我是快乐的小傻子,嘻嘻嘻嘻
3楼2013-03-04 08:19:57
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victory123

木虫 (正式写手)

会不会是分子量太大,形成交联卡在上样口了……
4楼2013-03-04 20:00:33
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黑色月光

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hsd3521 at 2013-03-03 14:54:11
请问较高蛋白含量是多少?测过蛋白含量没?

没有测含量,但粗略估计了下,30ml溶液中有0.5g左右的处理后的鱼鳞(基本是胶原),酶解后全部溶于溶液中,未见残留物,我已经提到过了,酶解用的是碱性蛋白酶,不可能酶解完全的。
电泳上样量是10微升酶解液,就这种情况下,还是什么条带都没有……
5楼2013-03-04 21:21:53
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黑色月光

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by victory123 at 2013-03-04 20:00:33
会不会是分子量太大,形成交联卡在上样口了……

我也想过这种情况,但后来用了酶解后的蛋白液上样,这个酶解是不完全的,照说应该有一连串的条带,但还是什么都没有
6楼2013-03-04 21:24:48
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黑色月光

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 鎏金 at 2013-03-04 08:19:57
上样缓冲液是什么?  加完之后怎么处理的咩?

就是基本的那些……然后煮沸
7楼2013-03-04 21:45:14
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time_729

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果不是分子量太大的问题,建议将样品缓冲液冻干一部分,或者以超滤等方法,提高目的蛋白的浓度后,在进行电泳
8楼2013-03-04 21:55:48
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120256674

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
hsd3521: 金币+1, 鼓励新虫交流,欢迎常来 2013-03-05 09:48:24
会不会是酶解液ph偏离中性 影响电泳
9楼2013-03-05 08:43:07
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黑色月光

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 120256674 at 2013-03-05 08:43:07
会不会是酶解液ph偏离中性 影响电泳

不会吧,我测过PH差不多在6左右,这有很大的影响吗?
10楼2013-03-05 20:36:29
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