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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 胶原蛋白的电泳为什么跑不出来？
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sunnymen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

hsd3521: 应助指数+1 2013-03-13 16:22:02
胶原蛋白分子量在100-300KDa之间，这个SDS-page一般跑不动，所以每条带。你酶解后要是水解充分成小分子肽，只要分子量小于10KDa，甘氨酸SDS-page跑不了这么小分子量的蛋白，可以尝试一下Tricine-sds-page
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11楼2013-03-08 17:19:51
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黑色月光

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by sunnymen at 2013-03-08 17:19:51
胶原蛋白分子量在100-300KDa之间，这个SDS-page一般跑不动，所以每条带。你酶解后要是水解充分成小分子肽，只要分子量小于10KDa，甘氨酸SDS-page跑不了这么小分子量的蛋白，可以尝试一下Tricine-sds-page

问题是，我的marker (10~200kD)跑出来了；那如果真的是跑不动，该用什么方法？
而且，我的酶解也是不完全的，就是还没测过分子量分布。
另外，你说的Tricine-sds-page是什么？主要有什么特点？适用于什么？
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12楼2013-03-10 14:42:47
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sunnymen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
黑色月光: 金币+5 2013-03-11 19:44:34
hsd3521: 应助指数+1 2013-03-13 16:21:33
Tricine-SDS-Page相对于我们常用的Glycine-SDS-Page来说它用Tricine替代了尾随离子Glycine，由于尾随离子性质的差异，使得Tricine-SDS-Page更适合跑小分子量蛋白，特别是分子量小于10KDa的小分子蛋白或多台，而且电泳时间缩短。
样品每条带考虑一下是不是样品浓度过低，我以前跑的时候样品浓度低也是每条大的。
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13楼2013-03-10 17:10:59
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黑色月光

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by sunnymen at 2013-03-10 17:10:59
Tricine-SDS-Page相对于我们常用的Glycine-SDS-Page来说它用Tricine替代了尾随离子Glycine，由于尾随离子性质的差异，使得Tricine-SDS-Page更适合跑小分子量蛋白，特别是分子量小于10KDa的小分子蛋白或多台，而且电 ...

谢谢，我去试一下
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14楼2013-03-11 19:44:21
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黑色月光

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by sunnymen at 2013-03-10 17:10:59
Tricine-SDS-Page相对于我们常用的Glycine-SDS-Page来说它用Tricine替代了尾随离子Glycine，由于尾随离子性质的差异，使得Tricine-SDS-Page更适合跑小分子量蛋白，特别是分子量小于10KDa的小分子蛋白或多台，而且电 ...

另外一个问题是：我的marker (10~200kD)跑出来了，说明电泳至少是跑得动200kD的样品，我担心的是，胶原蛋白分子形成交联后导致总体分子量太大，可能会超过200kD。如果在那种情况下，该用什么方法？
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15楼2013-03-11 19:50:40
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sunnymen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by 黑色月光 at 2013-03-11 19:50:40
另外一个问题是：我的marker (10~200kD)跑出来了，说明电泳至少是跑得动200kD的样品，我担心的是，胶原蛋白分子形成交联后导致总体分子量太大，可能会超过200kD。如果在那种情况下，该用什么方法？...

你把酶解后的溶液浓缩后上样试试看，如果出现条带就是以前浓度太低，如果还没有智能再找原因了
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16楼2013-03-11 23:26:45
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毛阿毛

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

酶解后  分子量太小了吧？估计都跑出去了。。。。。用下tricine体系的
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17楼2013-04-25 13:38:09
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Alexalex19

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

有可能真是跑出去了
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18楼2013-04-25 13:48:44
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82134428

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

分离胶浓度的选择不合适？
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19楼2013-10-21 16:46:48
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12fding12

金虫 (正式写手)
楼上的老兄  您好  您的问题解决了吗  我也遇到了同样的问题   请问怎么解决一下呢
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20楼2014-07-03 14:18:32
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