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pandashu1988

铁虫 (初入文坛)

[求助] 跑电泳的一点小疑问

跑电泳时点样先加buffer还是DNA样本？
师兄说最好是把凝胶放在缓冲液里面点样，有什么好处？

下面是小生酶切DNA后跑电泳的图，先buffer后DNA，从右往左点样的，为什么buffer的带子右边的会比左边的跑的更前呢？还有大神们能看看哪个孔跑的片段更接近300~900bp,还是看不出来？额~
跑电泳的一点小疑问
jh 2013-07-03 19 小时 24 分钟_副本.jpg
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1楼 2013-07-03 20:15:08
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pandashu1988

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 幽魂银龙 at 2013-07-04 10:05:17
首先加样时应该把buffer和DNA混匀再加，再者我觉得你的DNA有问题，没有专一性，建议把PCR产物重新跑一次，如果还是这样得重新PCR啊，这没有你要的目的基因

，这个不是PCR产物，是直接提取总DNA割胶回收后酶切的，因为电泳检测看到有拖带~但是没有割胶回收直接把总DNA酶切的话就能在想要的片段大小那里看到明亮条带。。。所以很纠结，难道是DNA量不够，打算把回收的DNA P一下再来酶切看看
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9楼2013-07-04 14:29:56
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pandashu1988

铁虫 (初入文坛)
用的是2000的MARKER
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2楼2013-07-03 20:16:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-04 02:57:59
我觉得你的问题很怪，电泳上样buffer和样品是要混合起来的，顺序只是方便操作的问题。一般都是先buffer，可以用一个枪头去吸，然后加入样品，因为枪头上带了样品，不能反复使用造成污染。没有缓冲液的样品孔里是空气，首先这对胶不好，容易干掉。其次，点样时如果在缓冲液里样品可以加在液体里会直接沉到样品孔的底部。所有的凝胶电泳都是这样做的。
至于你的电泳图，我觉得胶做得不行或者电泳条件有问题。marker都跑歪了，而且条带不清晰。
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3楼2013-07-03 23:39:15
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pandashu1988

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-03 23:39:15
我觉得你的问题很怪，电泳上样buffer和样品是要混合起来的，顺序只是方便操作的问题。一般都是先buffer，可以用一个枪头去吸，然后加入样品，因为枪头上带了样品，不能反复使用造成污染。没有缓冲液的样品孔里是空气 ...

嗯，多谢解答，嘿嘿~我还想问下，泡成这样看不清，是不是DNA总量也不够，切开了也看不清？
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4楼2013-07-04 08:47:02
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