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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Tricine-SDS-PAGE电泳结果分析，
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maomaochongk

新虫 (初入文坛)

[求助] Tricine-SDS-PAGE电泳结果分析，

做了一个小分子的电泳，海洋酵母的，marker还可以，不知道为什么样品，特点是小分子特别差，是不是盐分高了？方法是按照nature的方法做的，还是有别的原因，谢谢大家啊。。。。。
Tricine-SDS-PAGE电泳结果分析，
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1楼 2013-11-19 17:21:44
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-20 10:32:24
上样量太高，变性不充分。不清楚你的样品的buffer, 不过浓度过高的盐对普通SDS-PAGE也有很大影响。
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3楼2013-11-20 04:14:54
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牧炀

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-20 10:32:20
你把分离胶的浓度往小了调...而且你这块胶凝的时间估计是短了就马上上样了。顺便做个梯度加样吧  样品量有点多
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2楼2013-11-19 22:58:14
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maomaochongk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-11-19 22:58:14
你把分离胶的浓度往小了调...而且你这块胶凝的时间估计是短了就马上上样了。顺便做个梯度加样吧  样品量有点多

谢谢牧炀的意见。
分离胶的浓度具体调多少，根据你的经验，多谢
第一天制胶，第二天才上的样，胶的凝固应该可以
加样我减少一下吧
多谢啊。。。。。
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4楼2013-11-20 15:18:54
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maomaochongk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-20 04:14:54
上样量太高，变性不充分。不清楚你的样品的buffer, 不过浓度过高的盐对普通SDS-PAGE也有很大影响。

哦，我减少上样量试试
变性的话，是按照nature上说的37 °C for 15 min or for up to 60 min，还是煮沸3-5min啊？
我的上样buffer就是nature文献上的，我指的是我的样品是海洋材料，是不是样品中的盐分有点高啊。
谢谢你的建议。
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5楼2013-11-20 15:35:41
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牧炀

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by maomaochongk at 2013-11-20 15:18:54
谢谢牧炀的意见。
分离胶的浓度具体调多少，根据你的经验，多谢
第一天制胶，第二天才上的样，胶的凝固应该可以
加样我减少一下吧
多谢啊。。。。。...

我之前跑的时候大概都是1.5%这样的幅度下调的  胶我很少用过夜冷藏的  你试下胶凝完半小时后就上样跑下  因为你的图上条带扭曲的总觉的是因为胶中间凝的不是很好导致的  上样量可以考虑减少一半  我是做海洋生物的血红蛋白的  变性选择煮沸五分钟的  上样减少的话  增加样品缓冲液的比例就好  不然到时候条带也会看不出来的
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6楼2013-11-20 20:44:36
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maomaochongk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-11-20 20:44:36
我之前跑的时候大概都是1.5%这样的幅度下调的  胶我很少用过夜冷藏的  你试下胶凝完半小时后就上样跑下  因为你的图上条带扭曲的总觉的是因为胶中间凝的不是很好导致的  上样量可以考虑减少一半  我是做海洋生物的 ...

谢谢。。。。
我再试一下，减少上样量
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7楼2013-11-20 21:45:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by maomaochongk at 2013-11-20 15:35:41
哦，我减少上样量试试
变性的话，是按照nature上说的37 °C for 15 min or for up to 60 min，还是煮沸3-5min啊？
我的上样buffer就是nature文献上的，我指的是我的样品是海洋材料，是不是样品中的盐分有点高啊。 ...

是什么材料部重要，主要看你提取蛋白样品的缓冲液里的成分。煮沸对膜蛋白变性不好，容易聚集。可溶蛋白的话可以煮沸。
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8楼2013-11-21 06:45:16
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉也是制样的问题，建议充分变性试试看。另外上样前试着离心一下，取上清点样。还有电泳过程中注意低温。
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小兵一个
9楼2013-11-21 08:42:13
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maomaochongk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-21 06:45:16
是什么材料部重要，主要看你提取蛋白样品的缓冲液里的成分。煮沸对膜蛋白变性不好，容易聚集。可溶蛋白的话可以煮沸。...

哦，多谢，长见识不少
我的样品是乙醇沉淀后，0.01 M的 Tris-HCl （pH8.6）溶解的，不知道影响大不大？多谢 cicelyzh的指点。。。。
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10楼2013-11-22 08:50:00
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