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1楼2013-11-19 17:21:44

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cicelyzh

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感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-20 10:32:24

上样量太高，变性不充分。不清楚你的样品的buffer, 不过浓度过高的盐对普通SDS-PAGE也有很大影响。

赞一下(2人)

3楼2013-11-20 04:14:54

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牧炀

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-20 10:32:20

你把分离胶的浓度往小了调...而且你这块胶凝的时间估计是短了就马上上样了。顺便做个梯度加样吧样品量有点多

2楼2013-11-19 22:58:14

maomaochongk

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2楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-11-19 22:58:14
你把分离胶的浓度往小了调...而且你这块胶凝的时间估计是短了就马上上样了。顺便做个梯度加样吧样品量有点多

谢谢牧炀的意见。
分离胶的浓度具体调多少，根据你的经验，多谢
第一天制胶，第二天才上的样，胶的凝固应该可以
加样我减少一下吧
多谢啊。。。。。

4楼2013-11-20 15:18:54

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3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-20 04:14:54
上样量太高，变性不充分。不清楚你的样品的buffer, 不过浓度过高的盐对普通SDS-PAGE也有很大影响。

哦，我减少上样量试试
变性的话，是按照nature上说的37 °C for 15 min or for up to 60 min，还是煮沸3-5min啊？
我的上样buffer就是nature文献上的，我指的是我的样品是海洋材料，是不是样品中的盐分有点高啊。
谢谢你的建议。

5楼2013-11-20 15:35:41

牧炀

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4楼: Originally posted by maomaochongk at 2013-11-20 15:18:54
谢谢牧炀的意见。
分离胶的浓度具体调多少，根据你的经验，多谢
第一天制胶，第二天才上的样，胶的凝固应该可以
加样我减少一下吧
多谢啊。。。。。

...

我之前跑的时候大概都是1.5%这样的幅度下调的胶我很少用过夜冷藏的你试下胶凝完半小时后就上样跑下因为你的图上条带扭曲的总觉的是因为胶中间凝的不是很好导致的上样量可以考虑减少一半我是做海洋生物的血红蛋白的变性选择煮沸五分钟的上样减少的话增加样品缓冲液的比例就好不然到时候条带也会看不出来的

6楼2013-11-20 20:44:36

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6楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-11-20 20:44:36
我之前跑的时候大概都是1.5%这样的幅度下调的胶我很少用过夜冷藏的你试下胶凝完半小时后就上样跑下因为你的图上条带扭曲的总觉的是因为胶中间凝的不是很好导致的上样量可以考虑减少一半我是做海洋生物的 ...

谢谢。。。。
我再试一下，减少上样量

7楼2013-11-20 21:45:07

cicelyzh

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5楼: Originally posted by maomaochongk at 2013-11-20 15:35:41
哦，我减少上样量试试
变性的话，是按照nature上说的37 °C for 15 min or for up to 60 min，还是煮沸3-5min啊？
我的上样buffer就是nature文献上的，我指的是我的样品是海洋材料，是不是样品中的盐分有点高啊。 ...

是什么材料部重要，主要看你提取蛋白样品的缓冲液里的成分。煮沸对膜蛋白变性不好，容易聚集。可溶蛋白的话可以煮沸。

8楼2013-11-21 06:45:16