应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Tricine SDS-PAGE的样品缓冲液与蛋白质样品
91/1返回列表
查看: 2276  |  回复: 8
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

答案24

木虫 (初入文坛)

高中

[求助] Tricine SDS-PAGE的样品缓冲液与蛋白质样品

Tricine SDS-PAGE的样品缓冲液与蛋白质样品的混合比例，以及是否要煮沸，如果有蛋白质的lodding buffer ，是否还需要样品缓冲液？
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

答案24

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
认真仔细乐观的对待每一天
1楼2013-08-29 15:04:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牧炀

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-29 18:09:08
1、我也在做Tricine  不过样品处理液与蛋白质的比例要你自己试验过脱色之后才能知道的而且看你蛋白分子量大小和胶的浓度的。 不过我跑的是18%的胶，处理样品都是5μl粗品加20μl蒸馏水+25μl样品缓冲液；纯的蛋白的话按1:2的比例，就是10μl样品+20μl蒸馏水+30μl样品缓冲液；遇到分离后浓度极低的蛋白可以考虑增加样品量，浓度高就减少。

2、要煮沸的。我是煮沸3min。

3、lodding buffer其实跟样品处理液一样的，估计是没有巯基乙醇只含DTT，但是你要看清楚lodding buffer的浓缩倍数，到底是几乘的，稀释成1X处理液，稀释的时候要保证完全溶解。


嘎...祝楼主实验顺利
赞一下 回复此楼
2楼2013-08-29 16:08:29
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

答案24

木虫 (初入文坛)

高中
引用回帖:
2楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-08-29 16:08:29
1、我也在做Tricine  不过样品处理液与蛋白质的比例要你自己试验过脱色之后才能知道的而且看你蛋白分子量大小和胶的浓度的。 不过我跑的是18%的胶，处理样品都是5μl粗品加20μl蒸馏水+25μl样品缓冲液；纯的蛋白的 ...

谢谢您的答复
我做的是混合蛋白，没有测浓度，有蛋白粗提取液，这样的话，还要加水再加样品缓冲液吗？
我的样品缓冲液的配方如下：1ml甘油（100%）   0.5ml巯基乙醇   1ml 0.5mol/L Tris-HCL(PH6.8)   溴酚蓝（0.02%）   加入至5ml蒸馏水中，分装成1ml 大小。
请指点一二
赞一下 回复此楼
认真仔细乐观的对待每一天
3楼2013-08-29 22:20:52
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牧炀

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-30 18:06:28
引用回帖:
3楼: Originally posted by 答案24 at 2013-08-29 22:20:52
谢谢您的答复
我做的是混合蛋白，没有测浓度，有蛋白粗提取液，这样的话，还要加水再加样品缓冲液吗？
我的样品缓冲液的配方如下：1ml甘油（100%）   0.5ml巯基乙醇   1ml 0.5mol/L Tris-HCL(PH6.8)   溴酚蓝（0 ...

1、你用lowry和bradford测下混合蛋白的浓度，然后参考电泳结果确定。而且粗提液的话我自己做的时候基本都加水，因为浓度实在太高了。加样量建议不超过5μl，不然条带很难分的清的，也可以按3μl、4μl、5μl……。

2、加水的比例的话你自己可以做一个梯度加样，按不同比例比如1:2:3,5μl样品+10μl蒸馏水+15μl样品缓冲液，也可以1:4:5等等……直到你跑的条带彻底分开并且很清晰的时候。

3、我样品缓冲液的配比这样的：0.5mol/LTris-HCl(pH6.8)  1ml、巯基乙醇0.5ml、SDS 0.2g、溴酚蓝0.01g、甘油1ml(100%)、加水7.5ml配成10ml的样品处理液。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2013-08-30 15:05:12
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

答案24

木虫 (初入文坛)

高中
送红花一朵
谢谢
回复此楼
认真仔细乐观的对待每一天
5楼2013-08-31 17:12:43
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x1989y0205z

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-08-30 15:05:12
1、你用lowry和bradford测下混合蛋白的浓度，然后参考电泳结果确定。而且粗提液的话我自己做的时候基本都加水，因为浓度实在太高了。加样量建议不超过5μl，不然条带很难分的清的，也可以按3μl、4μl、5μl……。 ...

我最近的样品加入到点样空后很弥散，感觉不会沉到点样空底，我的缓冲液是买的2×，甘油量应该不会有影响，您能帮我分析一下原因吗
赞一下 回复此楼
加油
6楼2013-10-25 20:47:55
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牧炀

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-26 03:29:15
引用回帖:
6楼: Originally posted by x1989y0205z at 2013-10-25 20:47:55
我最近的样品加入到点样空后很弥散，感觉不会沉到点样空底，我的缓冲液是买的2×，甘油量应该不会有影响，您能帮我分析一下原因吗...

不会沉到点样孔底的话应该只有这么两种情况吧。
第一种是你加样的时候，比如我用移液枪加，枪头的位置没有进到点样孔，位置太高很容易弥散，沉底的就少。你把加样的位置深入点
第二种是你样品与电泳缓冲液的比重小了，可以通过增大样品和样品处理液的比例，比如你原来是10μl样品+2μl处理液，可以变成20μl样品+处理液


好吧.. 这个只是我的想法，具体有没有用不保证，希望顺利。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2013-10-25 23:23:25
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x1989y0205z

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-10-25 23:23:25
不会沉到点样孔底的话应该只有这么两种情况吧。
第一种是你加样的时候，比如我用移液枪加，枪头的位置没有进到点样孔，位置太高很容易弥散，沉底的就少。你把加样的位置深入点
第二种是你样品与电泳缓冲液的比重 ...

谢谢你的回复，这个我下次试一下。我再请问一下，我的溴酚蓝在电泳的过程中，在浓缩胶没有压缩成一条线，就是那种很弥散的、很宽的溴酚蓝前沿，可是最后跑到分离胶的低端时确又成了一条线，最后染色，脱色之后，发现蛋白质条带很弥散，你遇到过这种情况吗？是不是我的胶的问题啊
赞一下 回复此楼
加油
8楼2013-10-27 22:58:17
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牧炀

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by x1989y0205z at 2013-10-27 22:58:17
谢谢你的回复，这个我下次试一下。我再请问一下，我的溴酚蓝在电泳的过程中，在浓缩胶没有压缩成一条线，就是那种很弥散的、很宽的溴酚蓝前沿，可是最后跑到分离胶的低端时确又成了一条线，最后染色，脱色之后，发 ...

你可以适当增加浓缩胶的长度，让样品浓缩效果加强些；
然后你检查下配浓缩胶的时候你的贮液的pH是不是正确。把电压稍微调低点
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2013-10-28 11:59:28
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 答案24 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭