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答案24木虫 (初入文坛)
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Tricine SDS-PAGE的样品缓冲液与蛋白质样品
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| Tricine SDS-PAGE的样品缓冲液与蛋白质样品的混合比例，以及是否要煮沸，如果有蛋白质的lodding buffer ，是否还需要样品缓冲液？ |
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【答案】应助回帖
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-29 18:09:08
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1、我也在做Tricine 不过样品处理液与蛋白质的比例要你自己试验过脱色之后才能知道的而且看你蛋白分子量大小和胶的浓度的。 不过我跑的是18%的胶，处理样品都是5μl粗品加20μl蒸馏水+25μl样品缓冲液；纯的蛋白的话按1:2的比例，就是10μl样品+20μl蒸馏水+30μl样品缓冲液；遇到分离后浓度极低的蛋白可以考虑增加样品量，浓度高就减少。 2、要煮沸的。我是煮沸3min。 3、lodding buffer其实跟样品处理液一样的，估计是没有巯基乙醇只含DTT，但是你要看清楚lodding buffer的浓缩倍数，到底是几乘的，稀释成1X处理液，稀释的时候要保证完全溶解。 嘎...祝楼主实验顺利  |
2楼2013-08-29 16:08:29
答案24
木虫 (初入文坛)
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3楼2013-08-29 22:20:52
【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-30 18:06:28
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1、你用lowry和bradford测下混合蛋白的浓度，然后参考电泳结果确定。而且粗提液的话我自己做的时候基本都加水，因为浓度实在太高了。加样量建议不超过5μl，不然条带很难分的清的，也可以按3μl、4μl、5μl……。 2、加水的比例的话你自己可以做一个梯度加样，按不同比例比如1:2:3,5μl样品+10μl蒸馏水+15μl样品缓冲液，也可以1:4:5等等……直到你跑的条带彻底分开并且很清晰的时候。 3、我样品缓冲液的配比这样的：0.5mol/LTris-HCl(pH6.8) 1ml、巯基乙醇0.5ml、SDS 0.2g、溴酚蓝0.01g、甘油1ml(100%)、加水7.5ml配成10ml的样品处理液。 |
4楼2013-08-30 15:05:12
答案24
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