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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Tricine SDS-PAGE的样品缓冲液与蛋白质样品
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答案24

木虫 (初入文坛)

高中

[求助] Tricine SDS-PAGE的样品缓冲液与蛋白质样品

Tricine SDS-PAGE的样品缓冲液与蛋白质样品的混合比例，以及是否要煮沸，如果有蛋白质的lodding buffer ，是否还需要样品缓冲液？
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认真仔细乐观的对待每一天
1楼 2013-08-29 15:04:58
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x1989y0205z

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-08-30 15:05:12
1、你用lowry和bradford测下混合蛋白的浓度，然后参考电泳结果确定。而且粗提液的话我自己做的时候基本都加水，因为浓度实在太高了。加样量建议不超过5μl，不然条带很难分的清的，也可以按3μl、4μl、5μl……。 ...

我最近的样品加入到点样空后很弥散，感觉不会沉到点样空底，我的缓冲液是买的2×，甘油量应该不会有影响，您能帮我分析一下原因吗
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加油
6楼2013-10-25 20:47:55
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x1989y0205z

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-10-25 23:23:25
不会沉到点样孔底的话应该只有这么两种情况吧。
第一种是你加样的时候，比如我用移液枪加，枪头的位置没有进到点样孔，位置太高很容易弥散，沉底的就少。你把加样的位置深入点
第二种是你样品与电泳缓冲液的比重 ...

谢谢你的回复，这个我下次试一下。我再请问一下，我的溴酚蓝在电泳的过程中，在浓缩胶没有压缩成一条线，就是那种很弥散的、很宽的溴酚蓝前沿，可是最后跑到分离胶的低端时确又成了一条线，最后染色，脱色之后，发现蛋白质条带很弥散，你遇到过这种情况吗？是不是我的胶的问题啊
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加油
8楼2013-10-27 22:58:17
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