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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Tricine-SDS-PAGE电泳结果分析，
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maomaochongk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by linxt2005 at 2013-11-21 08:42:13
感觉也是制样的问题，建议充分变性试试看。另外上样前试着离心一下，取上清点样。还有电泳过程中注意低温。

应该是制样的问题，我又降低上样量跑了一下，分子量3.5k的marker跑了出来，但是10k以下的样品还是不清楚。
其中7是marker，最低分子量3.5；    1、4、8是乙醇沉淀后tris-cl溶解的，其他的是tris-cl研磨液。
为什么会出现这样的结果呢，谢谢了。。。。
Tricine-SDS-PAGE电泳结果分析，
2013.11.22.jpg
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11楼2013-11-22 09:05:12
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by maomaochongk at 2013-11-22 08:50:00
哦，多谢，长见识不少
我的样品是乙醇沉淀后，0.01 M的 Tris-HCl （pH8.6）溶解的，不知道影响大不大？多谢 cicelyzh的指点。。。。...

你的样品只是溶解在tris里，应该不是盐的问题。不知道你的loading buffer用的什么pH。如果是在pH6.8的tris里的话，样品最好也溶解在pH为6.8的Tris里。如果loading buffer不含tris，最好也把样品溶在pH6.8的tris里，与浓缩胶的pH一致。
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12楼2013-11-22 11:06:54
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jineijin1227

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

原因可能有以下几个：一个是上样量的问题，一个你的胶配的也不是很好，因为marker都有一定的扭曲，可能有点花胶，建议你每次配完分离胶和封口胶后尽量挥干板内水分，再配下一个胶，还有就是样品没有变性完全，建议加   loading buffer 后煮沸3~5分钟，稍微离心下再上样！希望对你有所帮助
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13楼2013-11-28 14:13:03
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maomaochongk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by jineijin1227 at 2013-11-28 14:13:03
原因可能有以下几个：一个是上样量的问题，一个你的胶配的也不是很好，因为marker都有一定的扭曲，可能有点花胶，建议你每次配完分离胶和封口胶后尽量挥干板内水分，再配下一个胶，还有就是样品没有变性完全，建议加 ...

谢谢jineijin1227，
1.上样量我做一下梯度试试
2.marker弯曲可能是分离胶上缘不整齐，（胶是配了2h后用的，应该不存在凝固不完全的问题）
3.样品变性时，我分别用了37度45min，50度30min，煮沸4min，效果都一样，应该是样品本身的问题，再提一下试试吧。
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14楼2013-11-28 16:45:08
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阳光紫昕

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-20 04:14:54
上样量太高，变性不充分。不清楚你的样品的buffer, 不过浓度过高的盐对普通SDS-PAGE也有很大影响。

请问浓度过高的盐对普通SDS-PAGE有什么影响，我的实验目的条带也跑不出来，当时BMMY中加了磷酸钾缓冲液，看了您的回复，猜测是不是我的样品中有钾离子的原因。请赐教啊！万分感谢。
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15楼2013-12-05 20:44:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 阳光紫昕 at 2013-12-05 20:44:31
请问浓度过高的盐对普通SDS-PAGE有什么影响，我的实验目的条带也跑不出来，当时BMMY中加了磷酸钾缓冲液，看了您的回复，猜测是不是我的样品中有钾离子的原因。请赐教啊！万分感谢。...

是的。有钾离子对胶的影响比较大，会让SDS沉淀聚集，破坏蛋白表面的负电荷。如果可能，尽量避免使用磷酸钾。必须要用的话，最好可以在跑SDS-PAGE前除去。
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16楼2013-12-05 22:33:42
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