【答案】应助回帖

11楼2013-11-22 09:05:12

cicelyzh

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【答案】应助回帖

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10楼: Originally posted by maomaochongk at 2013-11-22 08:50:00
哦，多谢，长见识不少
我的样品是乙醇沉淀后，0.01 M的 Tris-HCl （pH8.6）溶解的，不知道影响大不大？多谢 cicelyzh的指点。。。。...

你的样品只是溶解在tris里，应该不是盐的问题。不知道你的loading buffer用的什么pH。如果是在pH6.8的tris里的话，样品最好也溶解在pH为6.8的Tris里。如果loading buffer不含tris，最好也把样品溶在pH6.8的tris里，与浓缩胶的pH一致。

12楼2013-11-22 11:06:54

jineijin1227

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【答案】应助回帖

原因可能有以下几个：一个是上样量的问题，一个你的胶配的也不是很好，因为marker都有一定的扭曲，可能有点花胶，建议你每次配完分离胶和封口胶后尽量挥干板内水分，再配下一个胶，还有就是样品没有变性完全，建议加 loading buffer 后煮沸3~5分钟，稍微离心下再上样！希望对你有所帮助

13楼2013-11-28 14:13:03

maomaochongk

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13楼: Originally posted by jineijin1227 at 2013-11-28 14:13:03
原因可能有以下几个：一个是上样量的问题，一个你的胶配的也不是很好，因为marker都有一定的扭曲，可能有点花胶，建议你每次配完分离胶和封口胶后尽量挥干板内水分，再配下一个胶，还有就是样品没有变性完全，建议加 ...

谢谢jineijin1227，
1.上样量我做一下梯度试试
2.marker弯曲可能是分离胶上缘不整齐，（胶是配了2h后用的，应该不存在凝固不完全的问题）
3.样品变性时，我分别用了37度45min，50度30min，煮沸4min，效果都一样，应该是样品本身的问题，再提一下试试吧。

14楼2013-11-28 16:45:08

阳光紫昕

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3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-20 04:14:54
上样量太高，变性不充分。不清楚你的样品的buffer, 不过浓度过高的盐对普通SDS-PAGE也有很大影响。

请问浓度过高的盐对普通SDS-PAGE有什么影响，我的实验目的条带也跑不出来，当时BMMY中加了磷酸钾缓冲液，看了您的回复，猜测是不是我的样品中有钾离子的原因。请赐教啊！万分感谢。

15楼2013-12-05 20:44:31

cicelyzh

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15楼: Originally posted by 阳光紫昕 at 2013-12-05 20:44:31
请问浓度过高的盐对普通SDS-PAGE有什么影响，我的实验目的条带也跑不出来，当时BMMY中加了磷酸钾缓冲液，看了您的回复，猜测是不是我的样品中有钾离子的原因。请赐教啊！万分感谢。...

是的。有钾离子对胶的影响比较大，会让SDS沉淀聚集，破坏蛋白表面的负电荷。如果可能，尽量避免使用磷酸钾。必须要用的话，最好可以在跑SDS-PAGE前除去。

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16楼2013-12-05 22:33:42