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maomaochongk

新虫 (初入文坛)

[求助] Tricine-SDS-PAGE电泳结果分析,

做了一个小分子的电泳,海洋酵母的,marker还可以,不知道为什么样品,特点是小分子特别差,是不是盐分高了?方法是按照nature的方法做的,还是有别的原因,谢谢大家啊。。。。。
Tricine-SDS-PAGE电泳结果分析,
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by maomaochongk at 2013-11-20 15:35:41
哦,我减少上样量试试
变性的话,是按照nature上说的37 °C for 15 min or for up to 60 min,还是煮沸3-5min啊?
我的上样buffer就是nature文献上的,我指的是我的样品是海洋材料,是不是样品中的盐分有点高啊。 ...

是什么材料部重要,主要看你提取蛋白样品的缓冲液里的成分。煮沸对膜蛋白变性不好,容易聚集。可溶蛋白的话可以煮沸。
8楼2013-11-21 06:45:16
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牧炀

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-20 10:32:20
你把分离胶的浓度往小了调...而且你这块胶凝的时间估计是短了就马上上样了。顺便做个梯度加样吧  样品量有点多
2楼2013-11-19 22:58:14
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-20 10:32:24
上样量太高,变性不充分。不清楚你的样品的buffer, 不过浓度过高的盐对普通SDS-PAGE也有很大影响。
3楼2013-11-20 04:14:54
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maomaochongk

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-11-19 22:58:14
你把分离胶的浓度往小了调...而且你这块胶凝的时间估计是短了就马上上样了。顺便做个梯度加样吧  样品量有点多

谢谢牧炀的意见。
分离胶的浓度具体调多少,根据你的经验,多谢
第一天制胶,第二天才上的样,胶的凝固应该可以
加样我减少一下吧
多谢啊。。。。。
4楼2013-11-20 15:18:54
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