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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA提取，怎么老是降解？求指导！！
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小牛石刀

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA提取，怎么老是降解？求指导！！已有6人参与

最近在提取植物（苜蓿）RNA，用的是博迈德的RNA提取试剂盒，多次提取经过琼胶电泳，条带都很弥散，降解的厉害，求助原因！


     枪头、离心管都是进口的；
     4度离心；
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1楼2014-03-26 22:05:26
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回帖置顶 ( 共有1个 )

biostar2009

专家顾问 (正式写手)
★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 22:20:18
gyesang: 回帖置顶 2014-03-31 22:20:25
引用回帖:
16楼: Originally posted by 283503264 at 2014-03-27 22:01:50
请问大神，我提的rna5s带比其他两条带亮得多，是什么原因，有问题不
...

用agarose gel判断total RNA的完整性，最重要的指标是条带的完整性，也就是说，在28S 18S之间，两者的上下方，有没有弥散性的条带，注意是弥散性而不是很sharp的条带，因为这个取决于你的上样量，你要是跑10μg甚至更多的total RNA，这些地方就能看见其他的sharp 条带。一般而言上500 ng足矣。
因为一般跑total RNA不会用很高浓度的胶，1.5%最高了，所以5S和tRNA经常是一个smear状的，1%左右的时候无法区分5S和tRNA，高一点还可以看见5S下方还有一个弥散性的tRNA。这些小RNA因为是smear状的，所以经常显得亮一些。
最后，如果你是跑的EB胶先加到agarose里面的，要注意多跑一会，这个经常出现，不单单是total RNA，个人理解是这些较大的条带还没有充分吸收EB，如果你就跑一会会，肯定是最小的最亮。
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20楼2014-03-28 07:55:44
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wanjunfei153

铁虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-27 09:40:12
只要你不往管子里吐口水，RNA几乎不会降解，我抽的RNA经常桌上放好几天放忘了，拿去测序还是好好的。我们的枪头都是实验室大叔徒手抓进盒子的，虽说也是进口的散装的。
如果你用的试剂，实验室其余人搞得好，只有在 ...

你确定你提取的是RNA？
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7楼2014-03-27 12:38:32
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
★ ★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-27 15:12:45
只要你不往管子里吐口水，RNA几乎不会降解，我抽的RNA经常桌上放好几天放忘了，拿去测序还是好好的。我们的枪头都是实验室大叔徒手抓进盒子的，虽说也是进口的散装的。
如果你用的试剂，实验室其余人搞得好，只有在你这才出问题，那么你首先看看你的材料有没有问题，比如细胞，是不是已经半死不活了，这种细胞RNA已经开始降解了。
然后你检测RNA跑得胶，有没有问题，要是别人有确认好的样品你可以带上一个。
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6楼2014-03-27 09:40:12
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wanjunfei153 at 2014-03-27 12:38:32
你确定你提取的是RNA？...

哈哈，哈哈，哈哈
哎~
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9楼2014-03-27 14:04:35
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Hliotrope

木虫 (著名写手)
★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-03-27 15:12:54
还是操作问题吧，RNA酶很多地方都存在，稍不注意就进去了，带口罩，带手套，低温操作，没提过，但是看别人提过，反正比DNA严的多。。。
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Someone
4楼2014-03-27 09:05:28
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普通回帖

dizang2

新虫 (小有名气)
低温提取，depc水

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-03-26 23:39:15
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a315188797

新虫 (初入文坛)
★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-03-27 15:12:50
请问你们实验室有荧光PCR仪吗？如果没有的话，就得先普通PCR扩增后才能进行凝胶电泳，不然基本扩增不出来，如果有荧光PCR仪，效果会更好。
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3楼2014-03-27 08:32:51
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WAX2010

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-03-27 15:12:58
有Trizol的话可以用Trizol试一试，我们这边一师姐用试剂盒降解，用Trizol不降解
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大手牵小手
5楼2014-03-27 09:34:43
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cgspider

木虫 (正式写手)
戴手套！

台面要仔细消毒，找人少的房间，尽量避免一切人闲杂等。
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你的能力撑不起你的野心
8楼2014-03-27 13:32:40
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_hwq

新虫 (初入文坛)
你试剂盒是新的吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
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10楼2014-03-27 14:09:45
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