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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取RNA条带28/18为什么总是不成两倍关系啊？
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bio0407110

铜虫 (初入文坛)

[求助] 提取RNA条带28/18为什么总是不成两倍关系啊？

尊敬的各位大侠们，这是我提的植物叶片RNA跑的1%非变性琼脂糖电泳，因为后续实验对RNA要求很高很高，所以提了很多很多次了，但是总是没有传说中的28S/18S亮度为2/1啊！而且很多情况下尽然反过来，看似28S/18S为1/2是怎么回事儿呢？降解了吗？请多多指教啊！愁死。。。

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1楼 2012-11-07 14:38:39
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-14 16:27:36
后续要求高，是要做RNA-seq么
其实很多物种的RNA胶图都不是2:1的关系的……不少植物的也是这样的。你想确定它的质量，权威的方法是找一个安捷伦2100，跑一下样品，它会给出详细的报告（针对植物有个专门的设定，这也再次证明植物的RNA和动物不大一样）
如果搞不到，只能看胶图的话，那么你可以看弥散严不严重，看条带亮度，是不是边缘清晰（sharp否？），这些都比2：1啥的要重要
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2楼2012-11-07 14:57:54
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wppabcd

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-14 16:27:47
提的快的话应该有2:1的情况，前段时间做过测序，是要求2;1的，第一个片子上，上面明显是有污染的。下面那个片子得多跑一段时间，看来楼主技术不错，RNA很完整，让第二条带和其它带分离完全了，建议用2%的胶跑，新换电泳液
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3楼2012-11-07 17:18:07
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wangqi20092

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑胶上样有点大 上1/2试试看 图片再暗点就可以看出来是不是2:1了，太亮了看不出来。总体提的不错。
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4楼2012-11-07 21:44:08
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hchen82

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-14 16:27:56
本帖内容被屏蔽
5楼2012-11-14 10:02:17
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yx_sun70

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

没必要追求2：1，若只是做rt，胶中的rna完全可用。若做race，你的较用起来应该也没有问题。你条带下册看不出讲解的痕迹，同时条带也很清晰，若不是要求很高的后续实验，应用完全没问题
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6楼2012-11-24 23:40:37
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