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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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bio0407110

铜虫 (初入文坛)

[求助] 提取RNA条带28/18为什么总是不成两倍关系啊?

尊敬的各位大侠们,这是我提的植物叶片RNA跑的1%非变性琼脂糖电泳,因为后续实验对RNA要求很高很高,所以提了很多很多次了,但是总是没有传说中的28S/18S亮度为2/1啊!而且很多情况下尽然反过来,看似28S/18S为1/2是怎么回事儿呢?降解了吗?请多多指教啊!愁死。。。

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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-14 16:27:36
后续要求高,是要做RNA-seq么
其实很多物种的RNA胶图都不是2:1的关系的……不少植物的也是这样的。你想确定它的质量,权威的方法是找一个安捷伦2100,跑一下样品,它会给出详细的报告(针对植物有个专门的设定,这也再次证明植物的RNA和动物不大一样)
如果搞不到,只能看胶图的话,那么你可以看弥散严不严重,看条带亮度,是不是边缘清晰(sharp否?),这些都比2:1啥的要重要
2楼2012-11-07 14:57:54
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wppabcd

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-14 16:27:47
提的快的话应该有2:1的情况,前段时间做过测序,是要求2;1的,第一个片子上,上面明显是有污染的。下面那个片子得多跑一段时间,看来楼主技术不错,RNA很完整,让第二条带和其它带分离完全了,建议用2%的胶跑,新换电泳液
3楼2012-11-07 17:18:07
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wangqi20092

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
跑胶上样有点大 上1/2试试看 图片再暗点就可以看出来是不是2:1了,太亮了看不出来。总体提的不错。
4楼2012-11-07 21:44:08
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hchen82

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-14 16:27:56
本帖内容被屏蔽

5楼2012-11-14 10:02:17
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yx_sun70

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

没必要追求2:1,若只是做rt,胶中的rna完全可用。若做race,你的较用起来应该也没有问题。你条带下册看不出讲解的痕迹,同时条带也很清晰,若不是要求很高的后续实验,应用完全没问题
6楼2012-11-24 23:40:37
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