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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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dmtxbb

金虫 (正式写手)

[求助] 请问提出rna来还有三条带,为什么dna酶消化检测后后,就拖带了?

请见图。。。为什么消化后检测就发现三条带没了。。。这咋了??谢谢了

rna检测



消化后检测
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你定量消化后的RNA了吗,上样量是多少?
2楼2012-10-15 13:24:25
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dmtxbb

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-15 13:24:25
你定量消化后的RNA了吗,上样量是多少?

没有定量,我们准备消化完定量的。。上样量是3μ,消化完了就没了~
3楼2012-10-15 13:35:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-15 13:53:29
dmtxbb: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-10-15 14:07:18
引用回帖:
3楼: Originally posted by dmtxbb at 2012-10-15 13:35:43
没有定量,我们准备消化完定量的。。上样量是3μ,消化完了就没了~...

消化前看起来挺亮的,也是上了3ul?你拿多少做的消化,消化了多久?消化前最好也做个nanodrop,可以了解提的RNA大致的量和纯度,做消化的时候也可以根据量来用DNase。看你的第二张胶,好像跑得有点长,是不是跑久了扩散掉了?
4楼2012-10-15 13:49:55
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dmtxbb

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-15 13:49:55
消化前看起来挺亮的,也是上了3ul?你拿多少做的消化,消化了多久?消化前最好也做个nanodrop,可以了解提的RNA大致的量和纯度,做消化的时候也可以根据量来用DNase。看你的第二张胶,好像跑得有点长,是不是跑久了 ...

1、消化前点样的也用了3μ
2、15μ消化的,第一步buffer dnasei1和抑制剂,半小时,然后EDTA 10min
3、应该不会跑散了吧,maker都还完整呢。
谢谢你。
5楼2012-10-15 14:20:29
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zhangby2002

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dmtxbb: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-10-15 18:45:14
RNA是否降解了,你检测一下RNA浓度吗,用英俊的进行消化处理好点。另外你跑胶时里的电泳液是否用新配的,胶是否新做的,电压及电泳时间等
业精于勤,荒于嬉;行成于思,毁于随。
6楼2012-10-15 16:40:38
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dmtxbb

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zhangby2002 at 2012-10-15 16:40:38
RNA是否降解了,你检测一下RNA浓度吗,用英俊的进行消化处理好点。另外你跑胶时里的电泳液是否用新配的,胶是否新做的,电压及电泳时间等

谢谢了。电泳液不行难道会有问题么??我们老的50×电泳液,放了一年了,不过第一次跑的时候都还有条带啊。胶是新作的。电泳了10分钟左右呢。。
7楼2012-10-15 18:46:57
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weining1203

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
dmtxbb: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-15 22:32:57
之前买过的promega的Dnase,说明书上说消化完跑电泳会有弥散,如果消化完想跑完整的带,需要另外的步骤,加苯酚 氯仿 异戊醇等其他试剂纯化才可以。。。不知你的说明说上有没有这种说明

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

8楼2012-10-15 20:12:16
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dmtxbb

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by weining1203 at 2012-10-15 20:12:16
之前买过的promega的Dnase,说明书上说消化完跑电泳会有弥散,如果消化完想跑完整的带,需要另外的步骤,加苯酚 氯仿 异戊醇等其他试剂纯化才可以。。。不知你的说明说上有没有这种说明

恩,谢谢了,你提供了很好的信息,谢谢了。。我明天就去看看
9楼2012-10-15 22:34:40
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xudabin98

木虫 (正式写手)

你RNA检测那个图,18S明显比28S亮,已经有所降解。你那电泳液都放置那么久了,肯定有问题。已经降解了
10楼2012-10-16 00:13:58
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