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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问提出rna来还有三条带，为什么dna酶消化检测后后，就拖带了？
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dmtxbb

金虫 (正式写手)

[求助] 请问提出rna来还有三条带，为什么dna酶消化检测后后，就拖带了？

请见图。。。为什么消化后检测就发现三条带没了。。。这咋了？？谢谢了

rna检测



消化后检测
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1楼 2012-10-15 09:41:12
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你定量消化后的RNA了吗，上样量是多少？
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2楼2012-10-15 13:24:25
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dmtxbb

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-15 13:24:25
你定量消化后的RNA了吗，上样量是多少？

没有定量，我们准备消化完定量的。。上样量是3μ，消化完了就没了~
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3楼2012-10-15 13:35:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-15 13:53:29
dmtxbb: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-10-15 14:07:18
引用回帖:
3楼: Originally posted by dmtxbb at 2012-10-15 13:35:43
没有定量，我们准备消化完定量的。。上样量是3μ，消化完了就没了~...

消化前看起来挺亮的，也是上了3ul？你拿多少做的消化，消化了多久？消化前最好也做个nanodrop，可以了解提的RNA大致的量和纯度，做消化的时候也可以根据量来用DNase。看你的第二张胶，好像跑得有点长，是不是跑久了扩散掉了？
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4楼2012-10-15 13:49:55
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dmtxbb

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-15 13:49:55
消化前看起来挺亮的，也是上了3ul？你拿多少做的消化，消化了多久？消化前最好也做个nanodrop，可以了解提的RNA大致的量和纯度，做消化的时候也可以根据量来用DNase。看你的第二张胶，好像跑得有点长，是不是跑久了 ...

1、消化前点样的也用了3μ
2、15μ消化的，第一步buffer dnasei1和抑制剂，半小时，然后EDTA 10min
3、应该不会跑散了吧，maker都还完整呢。
谢谢你。
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5楼2012-10-15 14:20:29
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zhangby2002

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dmtxbb: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-10-15 18:45:14
RNA是否降解了，你检测一下RNA浓度吗，用英俊的进行消化处理好点。另外你跑胶时里的电泳液是否用新配的，胶是否新做的，电压及电泳时间等
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业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。
6楼2012-10-15 16:40:38
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dmtxbb

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhangby2002 at 2012-10-15 16:40:38
RNA是否降解了，你检测一下RNA浓度吗，用英俊的进行消化处理好点。另外你跑胶时里的电泳液是否用新配的，胶是否新做的，电压及电泳时间等

谢谢了。电泳液不行难道会有问题么？？我们老的50×电泳液，放了一年了，不过第一次跑的时候都还有条带啊。胶是新作的。电泳了10分钟左右呢。。
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7楼2012-10-15 18:46:57
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weining1203

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
dmtxbb: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-15 22:32:57
之前买过的promega的Dnase，说明书上说消化完跑电泳会有弥散，如果消化完想跑完整的带，需要另外的步骤，加苯酚 氯仿 异戊醇等其他试剂纯化才可以。。。不知你的说明说上有没有这种说明
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

dmtxbb
8楼2012-10-15 20:12:16
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dmtxbb

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by weining1203 at 2012-10-15 20:12:16
之前买过的promega的Dnase，说明书上说消化完跑电泳会有弥散，如果消化完想跑完整的带，需要另外的步骤，加苯酚 氯仿 异戊醇等其他试剂纯化才可以。。。不知你的说明说上有没有这种说明

恩，谢谢了，你提供了很好的信息，谢谢了。。我明天就去看看
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9楼2012-10-15 22:34:40
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xudabin98

木虫 (正式写手)
你RNA检测那个图，18S明显比28S亮，已经有所降解。你那电泳液都放置那么久了，肯定有问题。已经降解了
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10楼2012-10-16 00:13:58
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