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小牛石刀

新虫 (初入文坛)

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专业: 草地科学

[求助] RNA提取，怎么老是降解？求指导！！已有6人参与

最近在提取植物（苜蓿）RNA，用的是博迈德的RNA提取试剂盒，多次提取经过琼胶电泳，条带都很弥散，降解的厉害，求助原因！

枪头、离心管都是进口的；
4度离心；

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此时此地此身

1楼 2014-03-26 22:05:26

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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

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专业: 生物化学
管辖: 分子生物

★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 22:20:18
gyesang: 回帖置顶 2014-03-31 22:20:25

引用回帖:

16楼: Originally posted by 283503264 at 2014-03-27 22:01:50
请问大神，我提的rna5s带比其他两条带亮得多，是什么原因，有问题不
...

用agarose gel判断total RNA的完整性，最重要的指标是条带的完整性，也就是说，在28S 18S之间，两者的上下方，有没有弥散性的条带，注意是弥散性而不是很sharp的条带，因为这个取决于你的上样量，你要是跑10μg甚至更多的total RNA，这些地方就能看见其他的sharp 条带。一般而言上500 ng足矣。
因为一般跑total RNA不会用很高浓度的胶，1.5%最高了，所以5S和tRNA经常是一个smear状的，1%左右的时候无法区分5S和tRNA，高一点还可以看见5S下方还有一个弥散性的tRNA。这些小RNA因为是smear状的，所以经常显得亮一些。
最后，如果你是跑的EB胶先加到agarose里面的，要注意多跑一会，这个经常出现，不单单是total RNA，个人理解是这些较大的条带还没有充分吸收EB，如果你就跑一会会，肯定是最小的最亮。