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RNA提取，怎么老是降解？求指导！！ 已有6人参与
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最近在提取植物（苜蓿）RNA，用的是博迈德的RNA提取试剂盒，多次提取经过琼胶电泳，条带都很弥散，降解的厉害，求助原因！ 枪头、离心管都是进口的； 4度离心； |
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biostar2009
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gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 22:20:18
gyesang: 回帖置顶 2014-03-31 22:20:25
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 22:20:18
gyesang: 回帖置顶 2014-03-31 22:20:25
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用agarose gel判断total RNA的完整性，最重要的指标是条带的完整性，也就是说，在28S 18S之间，两者的上下方，有没有弥散性的条带，注意是弥散性而不是很sharp的条带，因为这个取决于你的上样量，你要是跑10μg甚至更多的total RNA，这些地方就能看见其他的sharp 条带。一般而言上500 ng足矣。 因为一般跑total RNA不会用很高浓度的胶，1.5%最高了，所以5S和tRNA经常是一个smear状的，1%左右的时候无法区分5S和tRNA，高一点还可以看见5S下方还有一个弥散性的tRNA。这些小RNA因为是smear状的，所以经常显得亮一些。 最后，如果你是跑的EB胶先加到agarose里面的，要注意多跑一会，这个经常出现，不单单是total RNA，个人理解是这些较大的条带还没有充分吸收EB，如果你就跑一会会，肯定是最小的最亮。 |
20楼2014-03-28 07:55:44
2楼2014-03-26 23:39:15
3楼2014-03-27 08:32:51
Hliotrope
木虫 (著名写手)
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4楼2014-03-27 09:05:28
