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铁虫 (初入文坛)

[交流] 求助各位大神！帮忙看下，我的RNA提取的怎么样。。。不胜感激！

我要测白头鹎avUCP的基因序列，提了很多次RNA，电泳结果都不好，大神帮忙看下，找下原因，图片见附件。
  主要步骤：

1.        固体组织破碎设备。准备下列装置之一，1)玻璃匀浆器。用高压灭菌蒸馏水洗涤数次。2)研钵。适用于液氮冻存组织的研磨，清洗同玻璃匀浆器。3)组织细胞超声破碎仪器。探头插入装满蒸馏水的试管或烧杯中，开启超声清洗探头30秒至1分钟。4)高速机械匀浆器(Polytron，Tekmar或类似产品)。打开开关，在蒸馏水中清洗分散器头数次。
2.        高压蒸汽30分钟消毒一次性吸头离心管。
3.        DEPC处理的双蒸水。加DEPC到水中至终浓度为0.01% v/v，室温过夜，高压消毒30分钟。用于溶解RNA，配制TE缓冲液和75％乙醇。
4.        普通双蒸水。高压消毒30分钟，用于冲洗器皿，配制琼脂糖凝胶和电泳用缓冲液。注意溶液配制后高压灭菌，但琼脂糖不能高压处理。
5.        冰盒和湿冰。在冰上进行操作有助于减少RNA降解。
6.        异丙醇，氯仿，纯乙醇，分析纯。75％乙醇用高压消毒的蒸馏水配制。
7.        其它用品。电泳槽，双蒸水冲洗。离心机和加样器，无需处理。
8.        戴手套。注意某些实验如提取质粒DNA使用大量RNA酶，为防污染须特别清洗实验器具和实验区域。
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1楼 2011-12-18 16:58:55
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liaotiantian

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
额 有DNA污染，点样孔附近的条带
降解严重了吧，最亮的貌似是5S咯。
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2楼2011-12-18 19:59:31
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通缉要饭

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
污染有点严重哦，DNA还有残留的
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3楼2011-12-18 20:30:53
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shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+3): 热心！ 2011-12-19 17:05:23
组织有没有液氮速冻保存，是不是用TRIZOL，谁说要在冰上操作，反而不好！还有枪头离心管最好用DEPC泡过的，不然就买无核酸酶的。
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4楼2011-12-18 20:51:05
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longrna

新虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
虽然我也比较粗犷，但你也太粗犷了。。。
DEPC处理是浓度是0.1%，0.01%估计太低了；
75%的乙醇你好歹也搞个DEPC水来配置吧，用灭菌蒸馏水及随意了；
特别是溶解RNA的，你随便弄个灭菌就拿来溶解RNA？.......

你baidu一下RNase吧...
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5楼2011-12-19 09:59:17
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dovekaoyan

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
最亮是5S的，离加样孔最近的条带是DNA的，所以不是很理想，应该5S前面那两条带比5S亮才好。
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6楼2011-12-19 16:17:14
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wang7x7x

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
降解的厉害，污染的厉害。提取很失败。


[ Last edited by wang7x7x on 2011-12-20 at 16:08 ]
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7楼2011-12-20 16:04:16
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FYCnl

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by shaquila at 2011-12-18 20:51:05:
组织有没有液氮速冻保存，是不是用TRIZOL，谁说要在冰上操作，反而不好！还有枪头离心管最好用DEPC泡过的，不然就买无核酸酶的。

组织有液氮速冻保存，用的Trizol，枪头离心管都是买的特质的、专为提RNA用的
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8楼2011-12-28 11:54:44
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FYCnl

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by longrna at 2011-12-19 09:59:17:
虽然我也比较粗犷，但你也太粗犷了。。。
DEPC处理是浓度是0.1%，0.01%估计太低了；
75%的乙醇你好歹也搞个DEPC水来配置吧，用灭菌蒸馏水及随意了；
特别是溶解RNA的，你随便弄个灭菌就拿来溶解RNA？.......
...

我那边写的有些错误，我用的DEPC处理是浓度是0.1%，70%酒精、溶解RNA的水都是高压过的depc水。
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9楼2011-12-28 11:56:56
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FYCnl

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by wang7x7x at 2011-12-20 16:04:16:
降解的厉害，污染的厉害。提取很失败。

[ Last edited by wang7x7x on 2011-12-20 at 16:08 ]

你提取的很好啊
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10楼2011-12-28 11:57:36
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jaiminzhang

新虫 (小有名气)
★
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你研磨样品的时候加TRIZOL一起磨把，我估计这样的效果好一些
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11楼2011-12-30 09:18:35
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跳动的RNA

禁言 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
12楼2012-01-13 10:22:16
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