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铁虫 (初入文坛)

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[交流] 求助各位大神！帮忙看下，我的RNA提取的怎么样。。。不胜感激！

我要测白头鹎avUCP的基因序列，提了很多次RNA，电泳结果都不好，大神帮忙看下，找下原因，图片见附件。
主要步骤：

1. 固体组织破碎设备。准备下列装置之一，1)玻璃匀浆器。用高压灭菌蒸馏水洗涤数次。2)研钵。适用于液氮冻存组织的研磨，清洗同玻璃匀浆器。3)组织细胞超声破碎仪器。探头插入装满蒸馏水的试管或烧杯中，开启超声清洗探头30秒至1分钟。4)高速机械匀浆器(Polytron，Tekmar或类似产品)。打开开关，在蒸馏水中清洗分散器头数次。
2. 高压蒸汽30分钟消毒一次性吸头离心管。
3. DEPC处理的双蒸水。加DEPC到水中至终浓度为0.01% v/v，室温过夜，高压消毒30分钟。用于溶解RNA，配制TE缓冲液和75％乙醇。
4. 普通双蒸水。高压消毒30分钟，用于冲洗器皿，配制琼脂糖凝胶和电泳用缓冲液。注意溶液配制后高压灭菌，但琼脂糖不能高压处理。
5. 冰盒和湿冰。在冰上进行操作有助于减少RNA降解。
6. 异丙醇，氯仿，纯乙醇，分析纯。75％乙醇用高压消毒的蒸馏水配制。
7. 其它用品。电泳槽，双蒸水冲洗。离心机和加样器，无需处理。
8. 戴手套。注意某些实验如提取质粒DNA使用大量RNA酶，为防污染须特别清洗实验器具和实验区域。

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1楼 2011-12-18 16:58:55

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铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

楼: Originally posted by longrna at 2011-12-19 09:59:17:
虽然我也比较粗犷，但你也太粗犷了。。。
DEPC处理是浓度是0.1%，0.01%估计太低了；
75%的乙醇你好歹也搞个DEPC水来配置吧，用灭菌蒸馏水及随意了；
特别是溶解RNA的，你随便弄个灭菌就拿来溶解RNA？.......
...

我那边写的有些错误，我用的DEPC处理是浓度是0.1%，70%酒精、溶解RNA的水都是高压过的depc水。