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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA提取，怎么老是降解？求指导！！
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小牛石刀

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dizang2 at 2014-03-26 23:39:15
低温提取，depc水

谢谢

我的4度离心，没用DEPC水，是RNA-free-wanter，前一段时间都能提出来，现在怎么也提不出来，
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11楼2014-03-27 14:24:02
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dizang2

新虫 (小有名气)
多少的细胞，什么细胞

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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12楼2014-03-27 14:36:30
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小牛石刀

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by dizang2 at 2014-03-27 14:36:30
多少的细胞，什么细胞

植物，苜蓿

100mg
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13楼2014-03-27 16:09:01
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dizang2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 小牛石刀 at 2014-03-27 16:09:01
植物，苜蓿

100mg...

植物不太了解
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14楼2014-03-27 16:26:27
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小牛石刀

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by dizang2 at 2014-03-27 16:26:27
植物不太了解...

感谢关注
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15楼2014-03-27 17:04:00
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283503264

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-27 09:40:12
只要你不往管子里吐口水，RNA几乎不会降解，我抽的RNA经常桌上放好几天放忘了，拿去测序还是好好的。我们的枪头都是实验室大叔徒手抓进盒子的，虽说也是进口的散装的。
如果你用的试剂，实验室其余人搞得好，只有在 ...

请问大神，我提的rna5s带比其他两条带亮得多，是什么原因，有问题不

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Action is the food and drink which will nourish my success.
16楼2014-03-27 22:01:50
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月夜饮雪

新虫 (正式写手)
在低温下，所用的仪器都提前用depc浸泡一下。做实验时带好口罩手套，

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17楼2014-03-27 23:11:25
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明月123

铁杆木虫 (小有名气)
提取时不要说话，叫旁边人也闭嘴。。哈哈

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此去经年！平淡，是生活的标签，努力，是成长的标签。
18楼2014-03-27 23:50:09
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liuqiuning

木虫 (正式写手)
用艾德莱试剂盒 rn38，试过好多盒子，效果最好。

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19楼2014-03-28 00:15:09
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 22:20:18
gyesang: 回帖置顶 2014-03-31 22:20:25
引用回帖:
16楼: Originally posted by 283503264 at 2014-03-27 22:01:50
请问大神，我提的rna5s带比其他两条带亮得多，是什么原因，有问题不
...

用agarose gel判断total RNA的完整性，最重要的指标是条带的完整性，也就是说，在28S 18S之间，两者的上下方，有没有弥散性的条带，注意是弥散性而不是很sharp的条带，因为这个取决于你的上样量，你要是跑10μg甚至更多的total RNA，这些地方就能看见其他的sharp 条带。一般而言上500 ng足矣。
因为一般跑total RNA不会用很高浓度的胶，1.5%最高了，所以5S和tRNA经常是一个smear状的，1%左右的时候无法区分5S和tRNA，高一点还可以看见5S下方还有一个弥散性的tRNA。这些小RNA因为是smear状的，所以经常显得亮一些。
最后，如果你是跑的EB胶先加到agarose里面的，要注意多跑一会，这个经常出现，不单单是total RNA，个人理解是这些较大的条带还没有充分吸收EB，如果你就跑一会会，肯定是最小的最亮。
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20楼2014-03-28 07:55:44
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