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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 种子中RNA的提取
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zhywancx

铜虫 (小有名气)

[交流] 种子中RNA的提取 已有5人参与

我最近用TRIzon法提取种子中的RNA，可最后得到的沉淀里含有淀粉、蛋白，我查了一下，说是中间抽提两次。不知道有没有做过的高手指点一下
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1楼 2012-02-28 15:51:32
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回帖置顶 ( 共有1个 )

狼行成单

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 谢谢参与 2013-12-31 21:30:26
曾经苦逼的做过半年的干的小麦种子RNA提取，大概总结出来点什么。
一般种子开花20day以内RNA可以提到很好的，但是20-30day就不是太好了，30day以后，基本上灌浆成熟了，PCD启动，不仅RNA基本上降解严重，DNA也降解了。估计取决于吸胀后时间吧，时间越长，开始萌动后，反而效果会好估计（这个没做过，猜的）
不要迷信那些专用Kit，曾经试过一个国产的，很坑爹的
试过用豆浆机什么的研磨种子后再提取（可能是豆浆机产热？），反正效果不如直接液氮研磨的，虽然硬的跟个石头样，手都快冻掉了……
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If you feel good，doit！
8楼2013-12-30 19:29:23
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eagle00768

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我们实验室都用专门提种子RNA 的kit
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2楼2012-02-28 16:33:37
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
最好用专门的Kit吧，以前帮做博后的师姐提过水稻种子的，试了多次没有成功
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3楼2012-02-28 18:51:56
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zhywancx

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by eagle00768 at 2012-02-28 16:33:37:
我们实验室都用专门提种子RNA 的kit

效果怎么样？我提的是小麦种子，而且是吸涨后的
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4楼2012-02-29 08:50:21
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eagle00768

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhywancx at 2012-02-29 08:50:21:
效果怎么样？我提的是小麦种子，而且是吸涨后的

效果挺好的阿，我们用来提拟南芥的，吸胀后的比干种子好提，干种子得率好像低一些，不过提得好的话浓度也是可以的。用的是进口的kit
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5楼2012-02-29 08:57:47
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yeyun0213

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
提取后试试先用DNA酶纯化然后再钝化，我们这里这样做的水稻种子的浓度纯度都非常高，买takara 产品就可以了
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我得坚持坚持在坚持
6楼2012-02-29 10:46:31
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zhywancx

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yeyun0213 at 2012-02-29 10:46:31:
提取后试试先用DNA酶纯化然后再钝化，我们这里这样做的水稻种子的浓度纯度都非常高，买takara 产品就可以了

你们的水稻种子用液氮研磨容易吗？我用液氮研磨小麦种子很费劲啊，种子硬的像石头啊
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7楼2012-04-10 09:49:48
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狼行成单

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
好像是用表面活性剂EDTA、SDS或者CTAB，多糖和核酸，蛋白在溶液中溶解度不一样，所以可以取出一大部分糖类（主要是淀粉），当然核算肯定会有损失。
蛋白质主要靠Trizol去除，一般30DPA左右的小麦种子（腊熟期），RNA质量还是挺好的。
这个方法是试了大概至少得有10种后才试出来的，文献上是用来提取拟南芥干种子的
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If you feel good，doit！
9楼2013-12-31 21:59:09
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啦啦啦23456

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by yeyun0213 at 2012-02-29 10:46:31
提取后试试先用DNA酶纯化然后再钝化，我们这里这样做的水稻种子的浓度纯度都非常高，买takara 产品就可以了

你好，我使用takara的试剂提取后，没有沉淀是什么原因？只有分层的油状物质
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10楼2017-11-07 19:25:06
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