应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA降解，求高人分析一下原因。
121/2返回列表12下一页
查看: 2568  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hjhjhj6

金虫 (小有名气)

[求助] RNA降解，求高人分析一下原因。

新手，提的斑马鱼肝脏和卵巢的RNA，takara的trizol，操作应该问题不大，枪头都是无RNA酶的。取样是新鲜样，20mg左右，1mltrizol，液氮和匀浆器法都试过，电泳图都差不多，5s条带特别亮。电泳液是TAE，DEPC水配置，找了很多原因，该注意的感觉都注意到了，DEPC处理什么的，但依然降解。氯仿、异丙醇没预冷，乙醇是-4度保存的，这个有影响吗？跟着别人的一起做也降解，别人的还好，是不是组织快还需要再小一点？
希望大家交流一下经验，一开始也提不好，后来把问题解决了的朋友说说问题出在哪里，供我参考。谢谢！
IM001245.Tif(2.66MB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4DTfp.pPqUAQA570?p=130497
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
HakunaMatata~
1楼 2013-01-07 17:27:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hjhjhj6: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 我现在做的好一些了，我觉得是跑胶的问题，正在改进中。 2013-01-14 20:37:59
hjhjhj6: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-01-15 17:43:55
最有可能是：1、你稀释RNA的DEPC水出问题，RNA被降解；2、电泳液出问题了，RNA在电泳过程中被降解
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2013-01-11 14:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

616057157

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hjhjhj6: 金币+3, ★有帮助 2013-01-14 20:43:44
hjhjhj6: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-01-15 17:44:09
亲，你在提取过程中要4度离心，且操作越快越好。你也要注意细胞数目和Trizol试剂的比列，裂解彻底，提取的RNA条带才好。
赞一下 回复此楼
不曾拥有何谈失去，不必伤心！！！
2楼2013-01-08 08:25:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hjhjhj6

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 616057157 at 2013-01-08 08:25:22
亲，你在提取过程中要4度离心，且操作越快越好。你也要注意细胞数目和Trizol试剂的比列，裂解彻底，提取的RNA条带才好。

谢谢  但这些都注意了啊。。。组织相对来说已经很小很小了  会不会是DEPC水的问题？  我水都是自己配置的  不是买的现成的
赞一下 回复此楼
HakunaMatata~
3楼2013-01-08 11:06:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

言默haha

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hjhjhj6: 金币+5, ★★★很有帮助, 嗯，我换了下水，感觉好一些 2013-01-14 20:36:56
hjhjhj6: 金币+5 2013-01-15 17:44:21
你应该检查一下使用水的质量 可能水已经污染了
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-11 10:57:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hjhjhj6: 金币+3 2013-01-14 20:44:16
hjhjhj6: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-01-15 17:44:40
提RNA是挺难弄得，但是如果严格按照说明书就是没有问题的。
首先你样品研磨后一定要马上加上trizon
台子也要过夜照
最好用专用的工作台
整个过程要快就行了
赞一下 回复此楼
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
6楼2013-01-11 15:59:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hjhjhj6

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yesali at 2013-01-11 14:44:16
最有可能是：1、你稀释RNA的DEPC水出问题，RNA被降解；2、电泳液出问题了，RNA在电泳过程中被降解

我发现提的RNA跑胶出来差别很大，本来跑出来只有一条带的，再跑一次又变好了；本来5S条带很亮的，第二次跑结果又很好，但跑出好结果的情况不太稳定。电泳缓冲液是DEPC水配的，配胶是0.56g+40mlTAE，大概1.5%，147v跑了10分钟，问题出在哪呢？
赞一下 回复此楼
HakunaMatata~
7楼2013-01-14 20:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

追梦的人1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hjhjhj6: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-01-15 09:53:03
hjhjhj6: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2013-01-15 17:44:47
这有可能是跑胶的过程中降解了，有可能是点样的过程中混进RNA酶了，总之，跑胶的环节也要尽量的注意
赞一下 回复此楼
8楼2013-01-14 21:03:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hjhjhj6

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 追梦的人1987 at 2013-01-14 21:03:46
这有可能是跑胶的过程中降解了，有可能是点样的过程中混进RNA酶了，总之，跑胶的环节也要尽量的注意

点样过程中混入RNA酶的可能性大不？  是不是Loading Buffer不太好？
还是胶的问题？
赞一下 回复此楼
HakunaMatata~
9楼2013-01-15 09:54:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

追梦的人1987

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hjhjhj6 at 2013-01-15 09:54:34
点样过程中混入RNA酶的可能性大不？  是不是Loading Buffer不太好？
还是胶的问题？...

也有可能的，loadingbuffer尽量单独用，和跑DNA的分开，buffer与RNA混合时，在无RNA酶的小pcr管里混合，还有就是整个过程要快，这样会好点
赞一下 回复此楼
10楼2013-01-15 14:03:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hjhjhj6 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 070300化学学硕求调剂 +5 太想进步了0608 2026-03-16 5/250 2026-03-16 14:11 by xwxstudy
[考研] 环境工程调剂 +4 大可digkids 2026-03-16 4/200 2026-03-16 14:00 by laoshidan
[考研] 化学工程321分求调剂 +7 大米饭！ 2026-03-15 7/350 2026-03-16 10:25 by 了了了了。。
[考研] 调剂 +8 调剂的考研学生 2026-03-09 8/400 2026-03-15 22:14 by Winj1e
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 材料371求调剂 +9 鳄鱼? 2026-03-11 11/550 2026-03-13 22:53 by JourneyLucky
[考研] 0703，333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] 336求调剂 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 293求调剂 +3 世界首富 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:27 by JourneyLucky
[考研] 土木第一志愿276求调剂，科研和技能十分丰富，求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考博] 读博申请 +5 感dd 2026-03-10 7/350 2026-03-11 17:02 by QGZDSYS
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭