应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA降解，求高人分析一下原因。
121/2返回列表12下一页
查看: 2957  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hjhjhj6

金虫 (小有名气)

[求助] RNA降解，求高人分析一下原因。

新手，提的斑马鱼肝脏和卵巢的RNA，takara的trizol，操作应该问题不大，枪头都是无RNA酶的。取样是新鲜样，20mg左右，1mltrizol，液氮和匀浆器法都试过，电泳图都差不多，5s条带特别亮。电泳液是TAE，DEPC水配置，找了很多原因，该注意的感觉都注意到了，DEPC处理什么的，但依然降解。氯仿、异丙醇没预冷，乙醇是-4度保存的，这个有影响吗？跟着别人的一起做也降解，别人的还好，是不是组织快还需要再小一点？
希望大家交流一下经验，一开始也提不好，后来把问题解决了的朋友说说问题出在哪里，供我参考。谢谢！
IM001245.Tif(2.66MB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4DTfp.pPqUAQA570?p=130497
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
HakunaMatata~
1楼 2013-01-07 17:27:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hjhjhj6: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 我现在做的好一些了，我觉得是跑胶的问题，正在改进中。 2013-01-14 20:37:59
hjhjhj6: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-01-15 17:43:55
最有可能是：1、你稀释RNA的DEPC水出问题，RNA被降解；2、电泳液出问题了，RNA在电泳过程中被降解
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2013-01-11 14:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

616057157

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hjhjhj6: 金币+3, ★有帮助 2013-01-14 20:43:44
hjhjhj6: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-01-15 17:44:09
亲，你在提取过程中要4度离心，且操作越快越好。你也要注意细胞数目和Trizol试剂的比列，裂解彻底，提取的RNA条带才好。
赞一下 回复此楼
不曾拥有何谈失去，不必伤心！！！
2楼2013-01-08 08:25:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hjhjhj6

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 616057157 at 2013-01-08 08:25:22
亲，你在提取过程中要4度离心，且操作越快越好。你也要注意细胞数目和Trizol试剂的比列，裂解彻底，提取的RNA条带才好。

谢谢  但这些都注意了啊。。。组织相对来说已经很小很小了  会不会是DEPC水的问题？  我水都是自己配置的  不是买的现成的
赞一下 回复此楼
HakunaMatata~
3楼2013-01-08 11:06:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

言默haha

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hjhjhj6: 金币+5, ★★★很有帮助, 嗯，我换了下水，感觉好一些 2013-01-14 20:36:56
hjhjhj6: 金币+5 2013-01-15 17:44:21
你应该检查一下使用水的质量 可能水已经污染了
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-11 10:57:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hjhjhj6: 金币+3 2013-01-14 20:44:16
hjhjhj6: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-01-15 17:44:40
提RNA是挺难弄得，但是如果严格按照说明书就是没有问题的。
首先你样品研磨后一定要马上加上trizon
台子也要过夜照
最好用专用的工作台
整个过程要快就行了
赞一下 回复此楼
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
6楼2013-01-11 15:59:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hjhjhj6

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yesali at 2013-01-11 14:44:16
最有可能是：1、你稀释RNA的DEPC水出问题，RNA被降解；2、电泳液出问题了，RNA在电泳过程中被降解

我发现提的RNA跑胶出来差别很大，本来跑出来只有一条带的，再跑一次又变好了；本来5S条带很亮的，第二次跑结果又很好，但跑出好结果的情况不太稳定。电泳缓冲液是DEPC水配的，配胶是0.56g+40mlTAE，大概1.5%，147v跑了10分钟，问题出在哪呢？
赞一下 回复此楼
HakunaMatata~
7楼2013-01-14 20:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

追梦的人1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hjhjhj6: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-01-15 09:53:03
hjhjhj6: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2013-01-15 17:44:47
这有可能是跑胶的过程中降解了，有可能是点样的过程中混进RNA酶了，总之，跑胶的环节也要尽量的注意
赞一下 回复此楼
8楼2013-01-14 21:03:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hjhjhj6

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 追梦的人1987 at 2013-01-14 21:03:46
这有可能是跑胶的过程中降解了，有可能是点样的过程中混进RNA酶了，总之，跑胶的环节也要尽量的注意

点样过程中混入RNA酶的可能性大不？  是不是Loading Buffer不太好？
还是胶的问题？
赞一下 回复此楼
HakunaMatata~
9楼2013-01-15 09:54:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

追梦的人1987

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hjhjhj6 at 2013-01-15 09:54:34
点样过程中混入RNA酶的可能性大不？  是不是Loading Buffer不太好？
还是胶的问题？...

也有可能的，loadingbuffer尽量单独用，和跑DNA的分开，buffer与RNA混合时，在无RNA酶的小pcr管里混合，还有就是整个过程要快，这样会好点
赞一下 回复此楼
10楼2013-01-15 14:03:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hjhjhj6 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +11 koalala 2026-08-24 13/650 2026-08-24 10:49 by anjeeshine
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +5 炎黄贵胄 2026-08-22 6/300 2026-08-24 06:34 by sincosx
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭