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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] 凝胶电泳检测到的真菌RNA是这个样子,是什么原因造成的? 已有4人参与

各位虫友们,最近一直在提真菌的RNA,最后凝胶电泳的结果是这个样子的,用的就是一般的琼脂糖凝胶电泳。
     我想知道,出现这个问题的原因是什么?要怎样做才能解决这个问题?
     麻烦路过的亲给点意见哦

凝胶电泳检测到的真菌RNA是这个样子,是什么原因造成的?
3.jpg
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喜欢生物,所以想好好研究下去!
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若溪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-01 10:29:57
第三泳道和第五泳道的条带挺正常的,18s和28s条带比较清晰,5s量比较少,一般条带很弱,只有RNA降解了才会出现特别多的小条带或弥散带
没有比脚更长的路,没有比人更高的山
2楼2014-08-01 08:29:40
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader


【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-01 10:30:11
不完美,但谈不上糟糕:
1、无DNA污染;
2、有28S和18S条带,虽然比例不是很好;
3、有降解。

主要问题是防止降解,另外走电泳时上样量不需要那么多(那两个太强了,分辨效果不好),走的时间在长点,让28S和18S分得更开些。
3楼2014-08-01 08:53:31
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wangling209

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-12 10:48:39
上样量稀释一下,浓度在200ng/微升的效果会好点,跑出的条带会更好看
4楼2014-08-10 15:01:40
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
4楼: Originally posted by wangling209 at 2014-08-10 15:01:40
上样量稀释一下,浓度在200ng/微升的效果会好点,跑出的条带会更好看

非常感谢!
喜欢生物,所以想好好研究下去!
5楼2014-08-10 20:04:44
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
3楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-01 08:53:31
不完美,但谈不上糟糕:
1、无DNA污染;
2、有28S和18S条带,虽然比例不是很好;
3、有降解。

主要问题是防止降解,另外走电泳时上样量不需要那么多(那两个太强了,分辨效果不好),走的时间在长点,让28S和 ...

上样量一般是5ul 的样子,是要降低上样量,还是要降低上样量的浓度?5s的条带比较微弱可以吗?就现在这个样子能继续做反转录吗?
喜欢生物,所以想好好研究下去!
6楼2014-08-10 20:09:16
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
2楼: Originally posted by 若溪 at 2014-08-01 08:29:40
第三泳道和第五泳道的条带挺正常的,18s和28s条带比较清晰,5s量比较少,一般条带很弱,只有RNA降解了才会出现特别多的小条带或弥散带

谢谢。就目前的状态,可以继续做反转录吗?
喜欢生物,所以想好好研究下去!
7楼2014-08-10 20:09:50
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若溪

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-08-10 20:09:50
谢谢。就目前的状态,可以继续做反转录吗?...

可以
没有比脚更长的路,没有比人更高的山
8楼2014-08-11 07:54:20
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竹子小小

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

明明很正常啊,楼主觉得哪里不对?
9楼2014-08-12 09:59:42
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
9楼: Originally posted by 竹子小小 at 2014-08-12 09:59:42
明明很正常啊,楼主觉得哪里不对?

感觉看不到5s的条带
喜欢生物,所以想好好研究下去!
10楼2014-09-11 19:01:39
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