应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么RNA总是降解！
411/5返回列表12345下一页
查看: 5058  |  回复: 40
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

看天

木虫 (知名作家)

[求助] 为什么RNA总是降解！

要做转录组分析，需要制备样品送到芯片分析公司让他们提取RNA做转录组分析，但是样品我准备2次了，邮寄到他们那边提出RNA后给出质检结果都是降解了，郁闷！
我的样品制备过程如下：
（1）在设计的时间点取样
（2）预冷水中超声清洗90s（我做的是吸附固定化，一般都是超声清洗下来，整个反应体系6ml连小瓶子都放进去了）
（3）取1ml菌液于1.5ml离心管中12000rpm离心1min,弃上清后再加入1ml离心2min。
（4）弃上清后加入1.2ml Trizol,用枪悬浮充分。
（5）液氮速冻2min.
（6）立即-80保存。
（7）2天后带干冰邮寄到公司。
（8）他们负责RNA的提取。
（9）5天后给出质检结果全部样品降解（RIN在4.5-6之间；28s/18s在0.1-0.4之间）

前后两次了发来质检结果都是降解，不知道到底是我的样品准备过程有问题还是其他问题？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
1楼 2012-10-24 20:37:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

匿名

用户注销 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
看天: 金币+3, 好的注意了 2012-11-09 12:46:41
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-09 14:20:42
本帖仅楼主可见
赞一下
39楼2012-11-09 10:55:08
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
普通回帖

看天

木虫 (知名作家)
来人回答啊
回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
2楼2012-10-25 10:08:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-10-25 12:13:42
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-26 08:06:33
1、细菌RNA的抽提并不困难，可以跟公司谈一下，你准备洗脱下来的活菌，除了超声破碎还有其他办法吗？
2、尽量用对数生长期后期的菌液。
3、超声破碎细菌之后，若不立刻处理，RNA严重降解，这点我试验过好几次，Rnase确实管用。
4、还是推荐送活菌由公司来处理比较合适。当然了，公司把你的样品如何存放的？若加入了足够提取剂，一般4℃一周问题不大。
5、把你处理后的样品自己小提一下，也同时提取一份活菌的，验证看看。

祝福好运哈！
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-25 11:01:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhwenxing at 2012-10-25 11:01:25
1、细菌RNA的抽提并不困难，可以跟公司谈一下，你准备洗脱下来的活菌，除了超声破碎还有其他办法吗？
2、尽量用对数生长期后期的菌液。
3、超声破碎细菌之后，若不立刻处理，RNA严重降解，这点我试验过好几次，Rn ...

(1)我只是超声清洗90s，不是超声破碎。
（2）实验设计的不同时间点的样，所以不能单取对数生长期后期
（3）我其实就是相当于吧 发酵液离心后搜集菌体加TRIZOL后送到公司的。
赞一下 回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
4楼2012-10-25 12:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看天

木虫 (知名作家)
回答我啊
回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
5楼2012-10-25 18:29:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 多谢啊 2012-10-25 21:09:59
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-10-26 08:06:47
楼主你也得看看公司那边怎么处理你的菌体的~看样子你是把菌体超声清洗就完了，菌体是没有破裂的~那么也就是要在公司那边将楼主泡在trizol里面的菌体破碎再处理。假如公司没有把菌体破裂开的话，那肯定提出来是降解的样子……
比如以前我提取的时候是柱子混着菌体以及trizol用机器打，抽出来常降解。后来咬咬牙用液氮磨，就再也没问题了……
赞一下 回复此楼
6楼2012-10-25 20:10:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-10-25 20:10:12
楼主你也得看看公司那边怎么处理你的菌体的~看样子你是把菌体超声清洗就完了，菌体是没有破裂的~那么也就是要在公司那边将楼主泡在trizol里面的菌体破碎再处理。假如公司没有把菌体破裂开的话，那肯定提出来是降解的 ...

是啊 我也不知道是我的准备过程有问题还是他们提取有问题；按理说这么一个生物芯片的公司 他们操作总是规范的 不应该出问题的
赞一下 回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
7楼2012-10-25 21:11:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 看天 at 2012-10-25 21:11:02
是啊 我也不知道是我的准备过程有问题还是他们提取有问题；按理说这么一个生物芯片的公司 他们操作总是规范的 不应该出问题的...

先问问那边的处理方法呗~看看方法是否科学~
那楼主你是什么样品啊放线菌？真菌？感觉是挺难处理的样品呢~
赞一下 回复此楼
8楼2012-10-26 08:00:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckydog52

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们实验室是用液氮磨碎之后提的RNA送去做转录组的
赞一下 回复此楼
自信源于一次次成功的积累
9楼2012-10-26 09:21:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-10-26 08:00:39
先问问那边的处理方法呗~看看方法是否科学~
那楼主你是什么样品啊放线菌？真菌？感觉是挺难处理的样品呢~...

是细菌 为梭菌 clostridium
赞一下 回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
10楼2012-10-26 09:33:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 看天 的主题更新
411/5返回列表12345下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 科研孤儿太难了 +18 我4大白菜 2026-08-20 19/950 2026-08-24 09:47 by 凯恩广盛催化分�
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +5 炎黄贵胄 2026-08-22 6/300 2026-08-24 06:34 by sincosx
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭