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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么RNA总是降解！
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看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
9楼: Originally posted by luckydog52 at 2012-10-26 09:21:11
我们实验室是用液氮磨碎之后提的RNA送去做转录组的

我们没提过RNA 不自信
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
11楼2012-10-26 09:33:45
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luckydog52

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
看天: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2012-10-26 10:03:51
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-27 15:45:13
引用回帖:
11楼: Originally posted by 看天 at 2012-10-26 09:33:45
我们没提过RNA 不自信...

有样本保存液，比如 天根的RNAStore样本保存液
http://www.tiangen.com/?productShow/t1/1/id/68.html

这个是我随便搜的，没用过不知道怎样。
不过你可以多咨询下别的公司。这类产品应该有很多
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自信源于一次次成功的积累
12楼2012-10-26 09:54:46
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看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
12楼: Originally posted by luckydog52 at 2012-10-26 09:54:46
有样本保存液，比如 天根的RNAStore样本保存液
http://www.tiangen.com/?productShow/t1/1/id/68.html

这个是我随便搜的，没用过不知道怎样。
不过你可以多咨询下别的公司。这类产品应该有很多...

我用的是TRIzol TRIzol说也能渗透菌体抑制RNase,
我也加了，还是不行啊
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
13楼2012-10-26 10:04:58
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luckydog52

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
看天: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2012-10-26 10:45:23
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-26 13:42:26
引用回帖:
13楼: Originally posted by 看天 at 2012-10-26 10:04:58
我用的是TRIzol TRIzol说也能渗透菌体抑制RNase,
我也加了，还是不行啊...

我们是液氮磨碎之后加TRIzol。提RNA

对菌体取完样是离心 液氮速冻 -80冰箱的。

不行你就磨碎了加 之后送样看看吧。

不如用那样本保存液试试。
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自信源于一次次成功的积累
14楼2012-10-26 10:10:22
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令狐冲?坌⌒�

至尊木虫 (知名作家)

魔道圣君

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-10-26 10:45:29
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-26 13:42:37
你说话吐沫中、实验器具上都可能有RNA降解酶，所有实验用具都要用DEPC洗泡 以除去RNA降解酶，实验过程要戴口罩 手套 穿白大褂
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君子藏器于身，待时而动！
15楼2012-10-26 10:20:39
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看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
14楼: Originally posted by luckydog52 at 2012-10-26 10:10:22
我们是液氮磨碎之后加TRIzol。提RNA

对菌体取完样是离心 液氮速冻 -80冰箱的。

不行你就磨碎了加 之后送样看看吧。

不如用那样本保存液试试。...

菌体离心液氮速冻-80度可以保存多长时间RNA不会有大的降解？
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16楼2012-10-26 10:46:18
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冰风颤木

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+4 2012-10-26 13:23:28
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-26 13:42:49
我最近也在做RNA的提取 我RNA确实是很容易降解的 我觉得你用保存菌种的EP管子 最好也是有DEPC处理后的 这样可能更好 你试试吧
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船到桥头自然直
17楼2012-10-26 13:00:00
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看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 冰风颤木 at 2012-10-26 13:00:00
我最近也在做RNA的提取 我RNA确实是很容易降解的 我觉得你用保存菌种的EP管子 最好也是有DEPC处理后的 这样可能更好 你试试吧

你是做细菌提取的吗
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18楼2012-10-26 13:23:44
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2012-10-26 17:47:34
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-27 15:45:35
1. “取1ml菌液于1.5ml离心管中12000rpm离心1min,弃上清后再加入1ml离心2min”，为什么不直接离两管呢。其实一管就够了，我做芯片时只用了100mg样。但这一步不是问题。
2.　“弃上清后加入1.2ml Trizol,用枪悬浮充分”如果不是公司的事，问题应该出在这里，离完心直接液氮冻了就可以了，完全没问题。加了Trizol可就难说了，Trizol的成分应该知道吧，这一步实在是弄巧成拙。
3.　公司太水了，这应该不是问题，他们用最好的盒子一个样收费才１００，应该不会冒这风险。
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生命不息，探索不止。
19楼2012-10-26 16:55:09
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看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
19楼: Originally posted by Arrennew at 2012-10-26 16:55:09
1. “取1ml菌液于1.5ml离心管中12000rpm离心1min,弃上清后再加入1ml离心2min”，为什么不直接离两管呢。其实一管就够了，我做芯片时只用了100mg样。但这一步不是问题。
2.　“弃上清后加入1.2ml Trizol,用枪悬浮充 ...

我觉得说不定还真像你分析的这样！
（1）我之前不知道，总是担心菌体量不够，后来才想明白1ml应该是足够的。
（2）我第一次做的时候没加TRIZOL的，也没有液氮速冻，后来降解了他们说叫我加TRIZOL可以防止RNA降解。于是第二遍我加了TRIZOL后充分悬浮并且液氮速冻，邮寄过去还是降解了并且质检结果好像比第一次还差，因此我在想为什么加了TRIZOL后结果并没变好呢？也有点怀疑TRIZOL一步的作用和影响。
  不过提取RNA不都是要加TRIZOL的吗，他们芯片公司也建议我加TRIZOL，你说“弄巧成拙”我虽觉得有理可是不甚明白啊？
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
20楼2012-10-26 18:21:11
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