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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么RNA总是降解！
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看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
19楼: Originally posted by Arrennew at 2012-10-26 16:55:09
1. “取1ml菌液于1.5ml离心管中12000rpm离心1min,弃上清后再加入1ml离心2min”，为什么不直接离两管呢。其实一管就够了，我做芯片时只用了100mg样。但这一步不是问题。
2.　“弃上清后加入1.2ml Trizol,用枪悬浮充 ...

（3）公司水不水不知道，不过第一次提取嘛他们是不算钱的
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
21楼2012-10-26 18:58:20
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看天

木虫 (知名作家)
继续求助啊
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22楼2012-10-27 14:40:42
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
看天: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2012-10-27 15:28:35
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-27 15:45:49
不液氮速冻肯定不行，我建议速冻后直接放冰箱。另外你如果非要加TRIZOL，量一定要够，提ＲＮＡ失败大部是因为裂解液加少了，但TRIZOL里的苯酚、异硫氰酸胍长时间会不会对ＲＮＡ造成化学切割我没做过实验，但值得注意。
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生命不息，探索不止。
23楼2012-10-27 14:50:42
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看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
23楼: Originally posted by Arrennew at 2012-10-27 14:50:42
不液氮速冻肯定不行，我建议速冻后直接放冰箱。另外你如果非要加TRIZOL，量一定要够，提ＲＮＡ失败大部是因为裂解液加少了，但TRIZOL里的苯酚、异硫氰酸胍长时间会不会对ＲＮＡ造成化学切割我没做过实验，但值得注意 ...

那我下次如下改进：
（1）发酵液搜集菌体没必要那么多
（2）不加TRIZOL了
（2）立马液氮速冻-80度保存。
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24楼2012-10-27 15:30:08
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beescity

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-10-27 18:24:42
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-29 15:50:00
我不懂微生物RNA提取。不过我推荐两种思路：
一是取样后用RNAlater之类的样品贮存液，然后再寄去公司。
二是自己用相应的试剂盒提取RNA，把RNA样品送过去。
通常RNA降解，我觉得更多的是生物体内的RNase没有控制住，而室外，器械和空气中的RNase，只要注意下， 不是故意去弄脏，不会这么严重。
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25楼2012-10-27 16:15:07
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看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
25楼: Originally posted by beescity at 2012-10-27 16:15:07
我不懂微生物RNA提取。不过我推荐两种思路：
一是取样后用RNAlater之类的样品贮存液，然后再寄去公司。
二是自己用相应的试剂盒提取RNA，把RNA样品送过去。
通常RNA降解，我觉得更多的是生物体内的RNase没有控制 ...

谢谢
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26楼2012-10-27 18:24:54
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494750284

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-29 15:50:12
看了这么多回复，没看完。你为什么不自己提了送RNA给公司呢？如果你用Trizol提的话，加入75%酒精之后，用干冰寄过去。
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27楼2012-10-27 19:57:13
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看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
27楼: Originally posted by 494750284 at 2012-10-27 19:57:13
看了这么多回复，没看完。你为什么不自己提了送RNA给公司呢？如果你用Trizol提的话，加入75%酒精之后，用干冰寄过去。

我自己没做过 没自信啊
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28楼2012-10-27 21:11:47
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494750284

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
看天: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-10-28 13:41:11
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-29 15:50:23
引用回帖:
28楼: Originally posted by 看天 at 2012-10-27 21:11:47
我自己没做过 没自信啊...

trizol法提rna的步骤网上还是很多的，火候注意一下就行了。我之前提问过TRIZOL法提RNA经验总结，你可以到我的话题里去看一下
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29楼2012-10-27 23:54:22
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王文钊-

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
看天: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-10-28 13:39:58
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-10-29 15:50:33
我们是用试剂盒提的，用液氮研磨法，基本不会降解。唯一一次是不小心用了非RNAfree的枪头测含量，结果里面的东西降解了。平时打开盖子的时候也要注意，讲话要戴口罩，不能用手拿管子的底部，因为手的温度较高。本人分子小白一个，希望能有点帮助。
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30楼2012-10-28 12:41:45
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