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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 5‘RACE求助
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liyanqi67

新虫 (初入文坛)

[求助] 5‘RACE求助

5’做了很多次了。但都不成功。条带也回收不上来。。
下面是跑的电泳图。。
请求哪位大侠能指点一二。


Maker 左边的三个孔是Inner 产物。 右边的是Outer 产物。
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1楼 2011-08-29 22:49:41
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liyanqi67

新虫 (初入文坛)
图片在这里。
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2楼2011-08-29 22:53:28
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wulishu

新虫 (初入文坛)
准备做，同问，为什么条带很暗，我每次做都是很暗的条带
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3楼2011-09-01 09:27:04
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redlizi

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

用这个产物再做一次PCR应该可以
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4楼2011-09-01 14:48:50
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
我也在做，也还在摸索阶段，学习一下吧，希望有高手，
我目前的问题是提取的RNA总是存在一定的降解，
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风雪夜归人
5楼2011-09-01 18:24:36
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wangjiancai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-08 13:43:10
提取的RNA在-20度的条件下是很容易降解的，保存的时间不长，你可以尝试在-80度保存你的RNA
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6楼2011-10-08 11:31:14
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ben1147

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

5'RACE是比3'难做一些，因为涉及加接头，并且RNA5‘端的完整性也比较难保持
条带淡不是问题，PCR产物稀释一下做模板再P一轮。毕竟跟RNA的丰度有关
跟没条带比起来已经很幸福了
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7楼2011-10-08 15:24:49
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫

【答案】应助回帖

你这个明显的是有产物，但不知道这个产物的长度是不是你预计的长度，如果是的话，你应该只是优化下后面的两轮PCR就可以了，不知道你点样的体积是多少，实在不行你扩大2轮反应的体系，大量回收，只要是你需要的序列你胶回收就可以测序了。你的引物2聚体比较亮啊
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好好学习，天天向上
8楼2012-05-22 09:45:23
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