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liyanqi67

新虫 (初入文坛)

[求助] 5‘RACE求助

5’做了很多次了。但都不成功。条带也回收不上来。。
下面是跑的电泳图。。
请求哪位大侠能指点一二。


Maker 左边的三个孔是Inner 产物。 右边的是Outer 产物。
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liyanqi67

新虫 (初入文坛)

2楼2011-08-29 22:53:28
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wulishu

新虫 (初入文坛)

准备做,同问,为什么条带很暗,我每次做都是很暗的条带
3楼2011-09-01 09:27:04
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redlizi

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

用这个产物再做一次PCR应该可以
4楼2011-09-01 14:48:50
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

我也在做,也还在摸索阶段,学习一下吧,希望有高手,
我目前的问题是提取的RNA总是存在一定的降解,
风雪夜归人
5楼2011-09-01 18:24:36
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wangjiancai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助! 2011-10-08 13:43:10
提取的RNA在-20度的条件下是很容易降解的,保存的时间不长,你可以尝试在-80度保存你的RNA
6楼2011-10-08 11:31:14
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ben1147

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

5'RACE是比3'难做一些,因为涉及加接头,并且RNA5‘端的完整性也比较难保持
条带淡不是问题,PCR产物稀释一下做模板再P一轮。毕竟跟RNA的丰度有关
跟没条带比起来已经很幸福了
7楼2011-10-08 15:24:49
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫

【答案】应助回帖

你这个明显的是有产物,但不知道这个产物的长度是不是你预计的长度,如果是的话,你应该只是优化下后面的两轮PCR就可以了,不知道你点样的体积是多少,实在不行你扩大2轮反应的体系,大量回收,只要是你需要的序列你胶回收就可以测序了。你的引物2聚体比较亮啊
好好学习,天天向上
8楼2012-05-22 09:45:23
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