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wulishu

新虫 (初入文坛)

[求助] 3'RACE求助！！

最近在做3'RACE，巢式PCR的时候总是没有目的产物，可以确定模板没有问题（用其他引物P此模板有目的片段），我做的序列目前还是未知序列，NCBI上没有的，我是通过高通量测序得到的一个片段，求高手指点！
都有什么原因会没有产物，我是刚注册的，没有很多金币，请见谅！
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jinkui960

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1楼 2011-06-28 17:16:01
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wulishu

新虫 (初入文坛)
请求高手帮助一下吧，没有人做过RACE吗？还是我发错地方了呢
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2楼2011-06-29 08:29:15
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
地方没错，再等等吧
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3楼2011-06-29 09:32:12
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wulishu

新虫 (初入文坛)
没人回复，只有自己顶起来了 ，哎。。。
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4楼2011-06-30 10:22:40
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zhangby2002

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

wulishu(金币+1): 2011-06-30 10:35:59
引用回帖:
Originally posted by wulishu at 2011-06-28 17:16:01:
最近在做3'RACE，巢式PCR的时候总是没有目的产物，可以确定模板没有问题（用其他引物P此模板有目的片段），我做的序列目前还是未知序列，NCBI上没有的，我是通过高通量测序得到的一个片段，求高手指点！
都有什么 ...

我也准备做这一块。对啦，你用的试剂盒是哪个公司的？多少钱？？
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业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。
5楼2011-06-30 10:28:59
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wulishu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zhangby2002 at 2011-06-30 10:28:59:
我也准备做这一块。对啦，你用的试剂盒是哪个公司的？多少钱？？

3'我没有用试剂盒，Takara的LA Taq酶和一些PCR的常规试剂
5'我打算用Takara的试剂盒，现在还没做5'，刚开始3'就遇到这个问题了
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6楼2011-06-30 10:38:16
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zhangby2002

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wulishu at 2011-06-30 10:38:16:
3'我没有用试剂盒，Takara的LA Taq酶和一些PCR的常规试剂
5'我打算用Takara的试剂盒，现在还没做5'，刚开始3'就遇到这个问题了

TAKARA的比较贵吧？？10个反应8000多吧？？
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业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。
7楼2011-06-30 10:45:00
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wulishu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zhangby2002 at 2011-06-30 10:45:00:
TAKARA的比较贵吧？？10个反应8000多吧？？

10次反转录，50次PCR是4000，但是反转录的cDNA可以做很多次PCR呀，差不多这一个试剂盒够用几十次呢吧
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8楼2011-06-30 10:50:37
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jinkui960

至尊木虫 (知名作家)
★ ★
送鲜花一朵
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-07-01 12:45:26
我以前用的是Invitrogen的试剂盒，5和3都一次性成功了，我觉得你可以换个盒子，或者换个方法试一下！
可以参考下面的链接：
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3322790&fpage=3
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9楼2011-06-30 12:52:34
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施斐

木虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-07-01 12:45:32
我就是用楼主的方法，race都是一次成功，建议再重新设引物
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10楼2011-07-01 08:37:01
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