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呼呼xinong

铁虫 (初入文坛)

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[交流] 3'RACE测序结果求助已有10人参与

本人现在做3race，测序结果存在一种现象，不知各位大侠遇到过没？在此求揭示！本人按照clontech的试剂盒做的结果，pcr，切胶回收，连接后转化，挑单克隆跑pcr，检查到目的条带后每个基因送测10个菌。测序结果都是我要的基因，但是相同基因不同菌落的序列之间存在差异，即在靠近polyA处，序列长短不一，也就是说3’UTR序列长短不一，但是前提条件是短的序列测序结果也含有polyA。请问这是什么现象？如何选择序列？

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1楼 2011-08-31 10:47:12

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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

suguolian

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我也做3‘-RACE，用的是特异性引物，PCR结果出现了单一条带，但是没达到预期的长度，是什么原因呢？？请教高人指点……谢谢

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6楼2013-09-11 10:13:57

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音四1990

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我还没到测序那一步……不过老师之前跟我说的在克隆时菌落大小和PCR产物大小有一定关系= =
我也不知为毛
不同菌落的测序结果确实会有差异所以RACE一般要测多个克隆
老师说一些小片段测出来会“很有意思” 我还没有参悟……楼主您加油！！！！！

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我没那种命啊轮也不会轮到我

7楼2014-03-09 16:57:46

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普通回帖

wulishu

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我也在做race，帮顶一下顺便学习学习

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2楼2011-09-01 09:01:41

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李春晓科研

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我也在做，一直是测序有问题。顶一下！请高人赐教

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3楼2011-11-20 14:42:54

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thinka

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wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-11-21 08:51:13

恭喜你，有可能你这个基因有“选择性多聚腺苷酸化”

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4楼2011-11-20 21:53:03

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dayulee

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Taq酶是使用的什么的呢？我也做了3RACE，还没出现你说的那种问题。我觉得你送10个去测序，很有可能是测序的问题吧。3'克隆到目标条带应该基本上是特异性的条带

好好学习，天天向上

5楼2012-05-21 22:55:42

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我很快乐3A87

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我也做RACE，盲目摸索好长时间了，每次送测序，要么浓度低，测不出来，要么送菌液测序失败，求指导啊！

只为自己所要的幸福快乐

8楼2014-03-10 16:33:15

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青青草allan

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引用回帖:

6楼: Originally posted by suguolian at 2013-09-11 10:13:57
我也做3‘-RACE，用的是特异性引物，PCR结果出现了单一条带，但是没达到预期的长度，是什么原因呢？？请教高人指点……谢谢

同样的问题，不知道怎么解释。很可能是非特异性扩增。拿去测个序试试。

爱出者爱返，福往者福来

9楼2014-09-12 16:30:36

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z604253372

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我要是做3RACE，测序结果比对后UTR少了100bp，不知道为什么

10楼2014-12-01 10:15:36

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