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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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呼呼xinong

铁虫 (初入文坛)

[交流] 3'RACE测序结果求助 已有10人参与

本人现在做3race,测序结果存在一种现象,不知各位大侠遇到过没?在此求揭示!本人按照clontech的试剂盒做的结果,pcr,切胶回收,连接后转化,挑单克隆跑pcr,检查到目的条带后每个基因送测10个菌。测序结果都是我要的基因,但是相同基因不同菌落的序列之间存在差异,即在靠近polyA处,序列长短不一,也就是说3’UTR序列长短不一,但是前提条件是短的序列测序结果也含有polyA。请问这是什么现象?如何选择序列?
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suguolian

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也做3‘-RACE,用的是特异性引物,PCR结果出现了单一条带,但是没达到预期的长度,是什么原因呢??请教高人指点……谢谢
6楼2013-09-11 10:13:57
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音四1990

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我还没到测序那一步……不过老师之前跟我说的 在克隆时菌落大小和PCR产物大小有一定关系= =
我也不知为毛
不同菌落的测序结果确实会有差异 所以RACE一般要测多个克隆
老师说一些小片段测出来会“很有意思” 我还没有参悟……楼主您加油!!!!!
我没那种命啊轮也不会轮到我
7楼2014-03-09 16:57:46
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普通回帖

wulishu

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
我也在做race,帮顶一下顺便学习学习
2楼2011-09-01 09:01:41
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李春晓科研

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
我也在做,一直是测序有问题。顶一下!请高人赐教
3楼2011-11-20 14:42:54
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thinka

铜虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-11-21 08:51:13
恭喜你,有可能你这个基因有“选择性多聚腺苷酸化”
4楼2011-11-20 21:53:03
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
Taq酶是使用的什么的呢?我也做了3RACE,还没出现你说的那种问题。我觉得你送10个去测序,很有可能是测序的问题吧。3'克隆到目标条带应该基本上是特异性的条带
好好学习,天天向上
5楼2012-05-21 22:55:42
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我很快乐3A87

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也做RACE,盲目摸索好长时间了,每次送测序,要么浓度低,测不出来,要么送菌液测序失败,求指导啊!
只为自己所要的幸福快乐
8楼2014-03-10 16:33:15
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青青草allan

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by suguolian at 2013-09-11 10:13:57
我也做3‘-RACE,用的是特异性引物,PCR结果出现了单一条带,但是没达到预期的长度,是什么原因呢??请教高人指点……谢谢

同样的问题,不知道怎么解释。很可能是非特异性扩增。拿去测个序试试。
爱出者爱返,福往者福来
9楼2014-09-12 16:30:36
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z604253372

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我要是做3RACE,测序结果比对后UTR少了100bp,不知道为什么
10楼2014-12-01 10:15:36
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