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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助3'-RACE问题
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lianyi1989

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助3'-RACE问题

做的3'-RACE出条带了，回收了之后，转化测序，测序结果找不到上游引物，只能找到下游引物UPM，还以为转化有问题。再次连接，转化，测序结果依然如此，还是找不到上游引物，真不知道什么原因，请各位高手指教下，多谢啦~
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1楼 2010-09-10 22:34:31
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whoisthis

铁虫 (小有名气)
★
lianyi1989(金币+1):谢谢参与
测序结果能和你之前得到的片段拼接上吗？如果能的话找不到也无所谓啦。
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2楼2010-09-11 05:15:32
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lianyi1989

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by whoisthis at 2010-09-11 05:15:32:
测序结果能和你之前得到的片段拼接上吗？如果能的话找不到也无所谓啦。

拼接不上呀，要是拼接上的话我就不在这发愁了...测序结果跟目的片段一点都拼接不上
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3楼2010-09-11 09:58:47
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sdqzsdqz

木虫 (著名写手)
★
lianyi1989(金币+1):谢谢参与
我觉得还是处在连接这步了，再看看序列
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4楼2010-09-11 10:39:30
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lianyi1989

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sdqzsdqz at 2010-09-11 10:39:30:
我觉得还是处在连接这步了，再看看序列

连接会出现什么问题呢？我感觉做的时候没什么差错啊
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5楼2010-09-11 11:02:45
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
★
lianyi1989(金币+1):谢谢参与
3-RACE还是比较容易做的,严格按照说明书上的来做
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6楼2010-09-11 11:15:29
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whoisthis

铁虫 (小有名气)
结果比对之后是你要的这个基因吗
是的话再设计引物p片段和3‘之间那段

不是的话重新设计GSP
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7楼2010-09-11 14:12:10
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
lianyi1989(金币+1):谢谢参与
楼主所谓的3RACE出带，和目标片段的大小完全一致吗？
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8楼2010-09-11 15:13:37
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jasco

木虫 (正式写手)
★
lianyi1989(金币+1):谢谢参与
可能是单引物延伸产物，而不是真的3'race产物
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9楼2010-09-11 15:54:49
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lianyi1989

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-09-11 15:54:49:
可能是单引物延伸产物，而不是真的3'race产物

出的条带与目标片段大小事一致的~如果是你说的单引物延伸扩展，是不是要重新设计引物？
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10楼2010-09-12 11:28:12
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