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pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】RACE 试剂盒问题 已有2人参与

在RACE smart race cdna amplification kit 的说明书里面提到了BD advantage 2 polymerase mix


请问是不是必须要用BD advantage 2 polymerase mix呢??谢谢

其他的牌子的话,能否推荐一下呢?
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gastrodia

金虫 (正式写手)

不一定,使用热启动的保真度高一点就可以,
2楼2010-04-27 11:19:23
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gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
amisking(金币+3): 2010-04-27 11:58
smart RACE关键是要提出高质量的RNA然后能顺利合成第一链cDNA,后面的扩增只要你的引物特异性比较好,tm高于72度就可以通过touchdown做出来,当然前提是你的目的基因在你的提得RNA中要有表达,用什么taq酶扩增并不重要,我曾经使用了全世金的transstart taq扩增出我的目的条带,但是其特异性不如advantage 2 polymerase Mix
3楼2010-04-27 11:30:08
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pidou213

木虫 (正式写手)

能否推荐一二呢??

advantage的太贵了
引用回帖:
Originally posted by gastrodia at 2010-04-27 11:30:08:
smart RACE关键是要提出高质量的RNA然后能顺利合成第一链cDNA,后面的扩增只要你的引物特异性比较好,tm高于72度就可以通过touchdown做出来,当然前提是你的目的基因在你的提得RNA中要有表达,用什么taq酶扩增并不 ...

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4楼2010-04-27 11:53:11
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pidou213

木虫 (正式写手)

内容已删除
见得多爱的多
5楼2010-04-27 11:53:36
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gastrodia

金虫 (正式写手)

我在上面已经说了啊,你可以使用热启动酶即可(如全式金的transstart或者宝生物的EXTAQ hot start version),实验条件同,只是把PCR的酶和缓冲液换掉
6楼2010-04-27 16:00:08
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gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
scelab(金币+3):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-27 22:56
pidou213(金币+2):谢谢你的详细讲解啊,真希望和你当面聊聊,嘿嘿 2010-04-27 23:43
另外,你必须仔细阅读RACE试剂盒上面引物设计的那块内容,好的引物非常重要,通常5'RACE和3‘race各设计2套引物,防止一条不行的时候可以换一条,一般说来3’race要相对容易,但也不全是这样,我使用smartRACE克隆基因的历史不长,但也有10来条了,有些基因5‘端容易,有些基因3'端容易,如果5’出来了,你就可以在其基础上p3‘,如果3’出来了,你就可以以期为基础P5‘,有时为了设计引物你还要检查你拿到的中间片段或EST序列的可靠性
7楼2010-04-27 16:08:08
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