| 查看: 2421 | 回复: 22 | ||
[求助]
3‘race 求助，急
|
||
最近一直做一基因家族成员的3’race，有3条，一条做出了全长，一条得到了中间片段和3’，还有一条只有中间片段。前面那些是师姐做的，我要做出来全长，可是最后这个的3’一直做不出来。用的是takara 3‘full race试剂盒。以前跑巢式都只有引物二聚体，现在是图片中显示的情况。请问是不是非特异扩增？怎样减少？用的温度梯度。 [ Last edited by yiyi12 on 2012-5-7 at 21:03 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有216人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 3'RACE测序结果求助
已经有11人回复
- 3'RACE求助！！
已经有13人回复
- 求助 酶的功能基因中如何根据片段基因得到全段序列~急
已经有7人回复
- 【求助/交流】3'RACE 结果有问题～～～
已经有8人回复
- 【求助/交流】请教一个3‘RACE的问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】3'RACE求助
已经有15人回复
- 【求助/交流】关于RACE
已经有3人回复
- 【求助/交流】3'RACE问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】5'Race反复做不出来，该怎么办
已经有74人回复
- 【求助/交流】5-RACE问题
已经有14人回复
4楼2012-05-08 10:32:09
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+5, 鼓励应助 2012-05-08 13:50:52
yiyi12: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-10 22:25:48
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+5, 鼓励应助 2012-05-08 13:50:52
yiyi12: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-10 22:25:48
|
你做内向PCR了没，外向有时都会出现这种情况，再做一下内向就行了。 3-RACE相对来说要好做的多，以前我也用宝生物的试剂盒，没出过问题。但现在都是直接合成引物，反转录后直接扩增，现在告诉楼主一种新方法： QT：CCAGTGAGCAGAGTGACGAGGACTCGAGCTCAAGCTTTTTTTTTT TTTTTTT Q0：CCAGTGAGCAGAGTGACG Q1：GAGGACTCGAGCTCAAGC 因为RNA的3末端加有polyA尾巴，，用上面加一通用引物的QT引物做反转录，也即取代之前的Oligo dT，得到的cDNA除了有poly(T)外，还有两个通用引物，然后用Q0作外向PCR，Q1做内向PCR，上游引物用你的基因特异性引物就行了。 |
3楼2012-05-08 09:03:42
hellolin
金虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1304.2
- 散金: 116
- 帖子: 186
- 在线: 77.2小时
- 虫号: 1399917
- 注册: 2011-09-13
- 专业: 昆虫学
2楼2012-05-07 23:24:15
5楼2012-05-08 10:33:31
6楼2012-05-08 10:33:39
7楼2012-05-08 10:37:08
zhengli123
金虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 591.1
- 散金: 20
- 红花: 1
- 帖子: 177
- 在线: 147.3小时
- 虫号: 1068301
- 注册: 2010-08-02
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
8楼2012-05-08 19:35:01
9楼2012-05-08 21:47:23
xiazhiwuxie
银虫 (小有名气)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 101.6
- 散金: 63
- 红花: 2
- 帖子: 94
- 在线: 40.4小时
- 虫号: 1149752
- 注册: 2010-11-18
- 性别: MM
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
10楼2012-05-09 08:51:34
