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yiyi12

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhengli123 at 2012-05-08 19:35:01:
说实话,胶跑的也不好

有点没跑开哦~
11楼2012-05-09 21:14:31
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yiyi12

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhengli123 at 2012-05-08 19:35:01:
说实话,胶跑的也不好

是啊。没跑开。
12楼2012-05-10 17:46:11
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yiyi12

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by linyanfei at 2012-05-08 21:47:23:
Takara 的3‘RACE试剂盒没问题的呀,我之前也一直用那个试剂盒,可能是你的特异引物设计的不太好吧?重新换一下特异引物了,做分子就是这样子的,呵呵,祝楼主实验顺利

有可能。可是我已经设计了好多个引物了。都这样啊~~~疯了都~
13楼2012-05-10 17:47:36
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yiyi12

银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by xiazhiwuxie at 2012-05-09 08:51:34:
我们实验室做3race都是自己合成带T的接头呢,不用试剂盒,在反转的时候注意使用oligodT就好了,楼主最好多设计几个上游引物,多做几次巢式PCR,如果还不行的话,检查一下RNA质量有没有问题

RNA检查了。没啥问题。你说的 “多做几轮PCR”是不止做内轮,还可以做第三轮第四轮巢式的意思么?
14楼2012-05-10 17:50:57
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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-12 15:30:50
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-12 23:04:28
引用回帖:
14楼: Originally posted by yiyi12 at 2012-05-10 17:50:57:
RNA检查了。没啥问题。你说的 “多做几轮PCR”是不止做内轮,还可以做第三轮第四轮巢式的意思么?

我的意思是说,一般3RACE 上游设计两个引物,有时会扩增不出来,你可以继续往后设计一个,可以做三次PCR,也可以选择两个引物做,我做过的最多也就是3次吧,一般两次就可以搞定
15楼2012-05-12 09:34:40
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yiyi12

银虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by xiazhiwuxie at 2012-05-12 09:34:40:
我的意思是说,一般3RACE 上游设计两个引物,有时会扩增不出来,你可以继续往后设计一个,可以做三次PCR,也可以选择两个引物做,我做过的最多也就是3次吧,一般两次就可以搞定

嗯。我明白了。呵呵。。多谢啊~
16楼2012-05-12 17:39:56
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by yiyi12 at 2012-05-08 10:37:08:
这个方法看起来不错啊。试剂盒的接头太少了。因为不止我自己用,所以做的时候不敢大胆地做。楼主这方法有什么出处不?到时候引用也方便。
    我的电泳图用的就是内轮产物跑的。这已经是我设计引物的最内轮了。

这个是经典RACE的方法,许多基因克隆的书上都有
17楼2012-05-13 16:49:50
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yiyi12

银虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 小猫三两只 at 2012-05-13 16:49:50:
这个是经典RACE的方法,许多基因克隆的书上都有

呃。。。我已经找到了。。多谢啦~~
18楼2012-05-14 12:44:42
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Alex_ppz

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小猫三两只 at 2012-05-08 09:03:42
你做内向PCR了没,外向有时都会出现这种情况,再做一下内向就行了。
3-RACE相对来说要好做的多,以前我也用宝生物的试剂盒,没出过问题。但现在都是直接合成引物,反转录后直接扩增,现在告诉楼主一种新方法:
QT ...

您好,我想问一下这个PCR过程就是和普通PCR一样吗?特异性引物设计的时候是把Q0和Q1的反向互补序列放到我的已知片段的3‘端然后设计是吗?十分感谢!
加油~~~
19楼2013-03-29 15:02:22
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yiyi12

银虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by Alex_ppz at 2013-03-29 15:02:22
您好,我想问一下这个PCR过程就是和普通PCR一样吗?特异性引物设计的时候是把Q0和Q1的反向互补序列放到我的已知片段的3‘端然后设计是吗?十分感谢!...

你的Q0和Q1是试剂盒的引物吗?如果是的话,没必要像你说的把Q0和Q1的反向互补序列放到已知片段的3‘端然后设计,直接用你的已知片段设计一个单的引物就行了,正好跟Q0或Q1配成一对。
20楼2013-04-02 09:39:09
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