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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 3‘race 求助，急
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yiyi12

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhengli123 at 2012-05-08 19:35:01:
说实话，胶跑的也不好

有点没跑开哦~
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11楼2012-05-09 21:14:31
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yiyi12

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhengli123 at 2012-05-08 19:35:01:
说实话，胶跑的也不好

是啊。没跑开。
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12楼2012-05-10 17:46:11
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yiyi12

银虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by linyanfei at 2012-05-08 21:47:23:
Takara 的3‘RACE试剂盒没问题的呀，我之前也一直用那个试剂盒，可能是你的特异引物设计的不太好吧？重新换一下特异引物了，做分子就是这样子的，呵呵，祝楼主实验顺利

有可能。可是我已经设计了好多个引物了。都这样啊~~~疯了都~
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13楼2012-05-10 17:47:36
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yiyi12

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xiazhiwuxie at 2012-05-09 08:51:34:
我们实验室做3race都是自己合成带T的接头呢，不用试剂盒，在反转的时候注意使用oligodT就好了，楼主最好多设计几个上游引物，多做几次巢式PCR，如果还不行的话，检查一下RNA质量有没有问题

RNA检查了。没啥问题。你说的 “多做几轮PCR”是不止做内轮，还可以做第三轮第四轮巢式的意思么？
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14楼2012-05-10 17:50:57
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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-12 15:30:50
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-12 23:04:28
引用回帖:
14楼: Originally posted by yiyi12 at 2012-05-10 17:50:57:
RNA检查了。没啥问题。你说的 “多做几轮PCR”是不止做内轮，还可以做第三轮第四轮巢式的意思么？

我的意思是说，一般3RACE 上游设计两个引物，有时会扩增不出来，你可以继续往后设计一个，可以做三次PCR，也可以选择两个引物做，我做过的最多也就是3次吧，一般两次就可以搞定
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15楼2012-05-12 09:34:40
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yiyi12

银虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by xiazhiwuxie at 2012-05-12 09:34:40:
我的意思是说，一般3RACE 上游设计两个引物，有时会扩增不出来，你可以继续往后设计一个，可以做三次PCR，也可以选择两个引物做，我做过的最多也就是3次吧，一般两次就可以搞定

嗯。我明白了。呵呵。。多谢啊~
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16楼2012-05-12 17:39:56
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by yiyi12 at 2012-05-08 10:37:08:
这个方法看起来不错啊。试剂盒的接头太少了。因为不止我自己用，所以做的时候不敢大胆地做。楼主这方法有什么出处不？到时候引用也方便。
    我的电泳图用的就是内轮产物跑的。这已经是我设计引物的最内轮了。

这个是经典RACE的方法，许多基因克隆的书上都有
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17楼2012-05-13 16:49:50
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yiyi12

银虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 小猫三两只 at 2012-05-13 16:49:50:
这个是经典RACE的方法，许多基因克隆的书上都有

呃。。。我已经找到了。。多谢啦~~
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18楼2012-05-14 12:44:42
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Alex_ppz

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小猫三两只 at 2012-05-08 09:03:42
你做内向PCR了没，外向有时都会出现这种情况，再做一下内向就行了。
3-RACE相对来说要好做的多，以前我也用宝生物的试剂盒，没出过问题。但现在都是直接合成引物，反转录后直接扩增，现在告诉楼主一种新方法：
QT ...

您好，我想问一下这个PCR过程就是和普通PCR一样吗？特异性引物设计的时候是把Q0和Q1的反向互补序列放到我的已知片段的3‘端然后设计是吗？十分感谢！
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加油~~~
19楼2013-03-29 15:02:22
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yiyi12

银虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by Alex_ppz at 2013-03-29 15:02:22
您好，我想问一下这个PCR过程就是和普通PCR一样吗？特异性引物设计的时候是把Q0和Q1的反向互补序列放到我的已知片段的3‘端然后设计是吗？十分感谢！...

你的Q0和Q1是试剂盒的引物吗？如果是的话，没必要像你说的把Q0和Q1的反向互补序列放到已知片段的3‘端然后设计，直接用你的已知片段设计一个单的引物就行了，正好跟Q0或Q1配成一对。
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20楼2013-04-02 09:39:09
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