应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 酶的功能基因中如何根据片段基因得到全段序列~急
81/1返回列表
查看: 1301  |  回复: 7
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

忧游鸟

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助 酶的功能基因中如何根据片段基因得到全段序列~急

想得到一个纯菌种的酶的功能基因，现在已设计引物得到其片段基因，如何根据片段基因得到表达这个酶的全段基因。看到文献说有根据片段基因设计反向引物测序，反向测序是不是会测出很长的序列？还是直接做克隆？但是现在又没有全段的相关引物。还有说纯化这个酶直接氨基酸测定其N端氨基酸序列（好像有什么ABI Procise protein sequencer）也可以么？

重金悬赏求助啊

[ Last edited by 忧游鸟 on 2011-6-13 at 10:19 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2011-06-13 10:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
忧游鸟(金币+5): 2011-06-13 11:13:21
西瓜(金币+5, EPI+1): 不愧是专家噢！ 2011-06-13 23:48:50
你说的两个方法都可以的。测定N端氨基酸序前要分离纯化，要求蛋白浓度较高，时间也长。你既然已经得到片段基因，也可以通过RACE(rapid-amplification ofcDNA ends)技术得到全段基因。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-13 10:52:49
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
忧游鸟(金币+15): 5 2011-06-13 11:13:26
西瓜(金币+3): 欢迎新虫交流 2011-06-13 23:49:03
引用回帖:
Originally posted by 忧游鸟 at 2011-06-13 10:18:01:
想得到一个纯菌种的酶的功能基因，现在已设计引物得到其片段基因，如何根据片段基因得到表达这个酶的全段基因。看到文献说有根据片段基因设计反向引物测序，反向测序是不是会测出很长的序列？还是直接做克隆？但是 ...

根据片段基因设计引物做RACE，分别得到3’端和5’端序列，最后序列拼接得到全长ｃＤＮＡ序列。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-13 10:53:34
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忧游鸟

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-13 10:52:49:
你说的两个方法都可以的。测定N端氨基酸序前要分离纯化，要求蛋白浓度较高，时间也长。你既然已经得到片段基因，也可以通过RACE(rapid-amplification ofcDNA ends)技术得到全段基因。

这个RACE 是不是要提RNA再反转录得到cDNA啊，难度是不是很大？是不是也根据得到的片段基因上设计反向引物呢  具体不是学分子生物的 希望你能详细解说一下 谢谢
赞一下 回复此楼
4楼2011-06-13 11:12:06
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忧游鸟

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by friya0910 at 2011-06-13 10:53:34:
根据片段基因设计引物做RACE，分别得到3’端和5’端序列，最后序列拼接得到全长ｃＤＮＡ序列。

设计引物也是反向设计引物么？
赞一下 回复此楼
5楼2011-06-13 11:15:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good！楼主可以先搜索下RACE基础知识来学习先。 2011-06-13 23:49:41
引用回帖:
Originally posted by 忧游鸟 at 2011-06-13 11:15:36:
设计引物也是反向设计引物么？

一端引物是你得到片段测序出来的，另外一端引物是接头引物或者PolyA引物，具体要看。先去把RACE的原理和流程看看，然后整理出个思路来。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-06-13 11:35:54
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfebst

至尊木虫 (职业作家)
直接在DNA层面做就可以了
根据得到的片段设计引物，做个基因组步移就行了TAIL-PCR
赞一下 回复此楼
7楼2011-06-16 23:37:42
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

quietorange

铁虫 (小有名气)
基于PCR的genome walking，原理跟上面有同学说的方法类似，大致说来就是提总DNA用平末端酶酶切，然后和人工合成的接头DNA连接作为模板，根据你已经克隆到的那一段设计一端的引物，根据接头设计另一端的引物，PCR。缺点是不一定一次能获得全长。
赞一下 回复此楼
8楼2011-06-17 01:16:44
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 忧游鸟 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 数学博导 +5 学术霸王 2024-09-25 8/400 2024-09-29 07:23 by 半生梦君
[教师之家] 东南大学电气学院电力电子方向招收硕士博士 +5 蜡笔小鑫1989 2024-09-26 8/400 2024-09-29 06:55 by willbuilder
[论文投稿] 你的学校职称晋升认CSCD吗？ +3 wowsunflower 2024-09-26 3/150 2024-09-29 03:20 by lyd782
[考博] 请问大家，我有希望进浙大普博么 +5 高艺文 2024-09-28 8/400 2024-09-29 00:08 by 小红豆
[硕博家园] 希望有师兄师姐帮忙引荐申博 +6 zhanyaqian 2024-09-25 11/550 2024-09-28 22:24 by 自强2019
[论文投稿] 求推荐医学类杂志 35+4 wshxtim1 2024-09-25 4/200 2024-09-28 13:56 by Wormaciae
[论文投稿] 想跟大家聊聊对国产SCI期刊的看法 +14 wleizl 2024-09-26 17/850 2024-09-28 11:59 by wleizl
[教师之家] 西湖大学教授：我可以自由地选择讲课的方式, 讲授的角度 +4 zju2000 2024-09-22 4/200 2024-09-28 09:40 by bio-polymer
[电化学] 刚装好的电池电压掉很快怎么解决？？ +3 花花你最棒 2024-09-26 6/300 2024-09-28 08:20 by cnofc
[育儿交流] 熊孩子睡觉前很多事，啥原因？ +7 quan2153 2024-09-25 14/700 2024-09-27 16:46 by quan2153
[基金申请] 请问大家的计划书填写列表中状态更新了吗？ +7 Laker610 2024-09-25 9/450 2024-09-27 16:36 by 田田hj
[教师之家] 压力山大 +17 暮色恋伊人 2024-09-24 25/1250 2024-09-27 16:10 by 领先于123
[考博] 电催化，电池方向学生自荐 30+3 Freelancedd 2024-09-24 10/500 2024-09-27 10:27 by 莱茵润色
[论文投稿] 期刊论文发表了但查询到sci未收录 50+5 yibuxiao 2024-09-25 11/550 2024-09-27 10:24 by 莱茵润色
[考博] 有机转材料申博难度 30+3 昕散 2024-09-22 10/500 2024-09-26 22:42 by 824282658
[有机交流] 请问胺的盐酸盐中氯化氢的氢会在核磁氢谱中出峰吗？ +3 rommel1975 2024-09-25 4/200 2024-09-26 13:07 by 091602
[论文投稿] NC投稿多久有消息呀？ +4 Jordanblood 2024-09-24 6/300 2024-09-25 16:58 by FZX_2024
[论文投稿] laser physics期刊投稿 5+3 mengxiangcz 2024-09-23 6/300 2024-09-25 15:08 by mengxiangcz
[论文投稿] SCI投稿状态 25+4 jorden8 2024-09-23 6/300 2024-09-25 10:24 by jorden8
[论文投稿] 爱斯维尔旗下Postharvest Biology and Technology，采用什么系统查查 20+4 sdsdsxh 2024-09-22 9/450 2024-09-25 07:33 by sdsdsxh
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭