应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 酶的功能基因中如何根据片段基因得到全段序列~急
51/1返回列表
查看: 1880  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

忧游鸟

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助 酶的功能基因中如何根据片段基因得到全段序列~急

想得到一个纯菌种的酶的功能基因，现在已设计引物得到其片段基因，如何根据片段基因得到表达这个酶的全段基因。看到文献说有根据片段基因设计反向引物测序，反向测序是不是会测出很长的序列？还是直接做克隆？但是现在又没有全段的相关引物。还有说纯化这个酶直接氨基酸测定其N端氨基酸序列（好像有什么ABI Procise protein sequencer）也可以么？

重金悬赏求助啊

[ Last edited by 忧游鸟 on 2011-6-13 at 10:19 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-13 10:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
忧游鸟(金币+15): 5 2011-06-13 11:13:26
西瓜(金币+3): 欢迎新虫交流 2011-06-13 23:49:03
引用回帖:
Originally posted by 忧游鸟 at 2011-06-13 10:18:01:
想得到一个纯菌种的酶的功能基因，现在已设计引物得到其片段基因，如何根据片段基因得到表达这个酶的全段基因。看到文献说有根据片段基因设计反向引物测序，反向测序是不是会测出很长的序列？还是直接做克隆？但是 ...

根据片段基因设计引物做RACE，分别得到3’端和5’端序列，最后序列拼接得到全长ｃＤＮＡ序列。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-13 10:53:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
忧游鸟(金币+5): 2011-06-13 11:13:21
西瓜(金币+5, EPI+1): 不愧是专家噢！ 2011-06-13 23:48:50
你说的两个方法都可以的。测定N端氨基酸序前要分离纯化，要求蛋白浓度较高，时间也长。你既然已经得到片段基因，也可以通过RACE(rapid-amplification ofcDNA ends)技术得到全段基因。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-13 10:52:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忧游鸟

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-13 10:52:49:
你说的两个方法都可以的。测定N端氨基酸序前要分离纯化，要求蛋白浓度较高，时间也长。你既然已经得到片段基因，也可以通过RACE(rapid-amplification ofcDNA ends)技术得到全段基因。

这个RACE 是不是要提RNA再反转录得到cDNA啊，难度是不是很大？是不是也根据得到的片段基因上设计反向引物呢  具体不是学分子生物的 希望你能详细解说一下 谢谢
赞一下 回复此楼
4楼2011-06-13 11:12:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忧游鸟

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by friya0910 at 2011-06-13 10:53:34:
根据片段基因设计引物做RACE，分别得到3’端和5’端序列，最后序列拼接得到全长ｃＤＮＡ序列。

设计引物也是反向设计引物么？
赞一下 回复此楼
5楼2011-06-13 11:15:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 26年电池方向博士申请 10+4 15615939259 2026-04-09 5/250 2026-04-16 12:37 by 墨荷之露
[考研] 求助调剂，跨调 +19 X十甫寸Y 2026-04-11 20/1000 2026-04-15 21:18 by cuisz
[考研] 085500求调剂材料 +11 易11122 2026-04-09 11/550 2026-04-14 17:59 by lhj2009
[考研] 药学305求调剂 +10 玛卡巴卡boom 2026-04-10 10/500 2026-04-14 15:55 by zs92450
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 求调剂 +16 雪逢冬 2026-04-10 16/800 2026-04-14 14:27 by 逆水乘风
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +16 李木子啊哈哈 2026-04-12 17/850 2026-04-14 09:11 by fenglj492
[考研] 300分求调剂 （085501机械专硕，本科扬大） +9 xu@841019 2026-04-11 10/500 2026-04-14 08:48 by 木木mumu～
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] 290求调剂 +18 柯淮然 2026-04-12 20/1000 2026-04-13 12:56 by cyh—315
[考研] 求调剂288 +7 ioodiiij 2026-04-10 9/450 2026-04-13 08:33 by Hayaay
[考研] 。 +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 材料与化工300求调剂 +39 肖开文 2026-04-09 43/2150 2026-04-12 01:30 by 秋豆菜芽
[考研] 化工调剂求导师收留！一志愿失利，踏实肯干，有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[考研] 一志愿985机械学硕380求调剂 +5 关关雎鸠10 2026-04-11 5/250 2026-04-11 10:10 by 知念。A
[考研] 0854调剂 +4 长弓傲 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:18 by 猪会飞
[考研] 083200 305分 求二轮调剂 不接受跨专业 +9 Claireyyyy 2026-04-09 10/500 2026-04-10 21:21 by Claireyyyy
[考研] 一志愿京区985，085401电子信息，本科电子信息 +3 阳光开朗的男孩 2026-04-10 3/150 2026-04-10 16:29 by sophia_93
[考研] 调剂申请086000一志愿西北农林科技大学生物与医药320分-本科齐鲁工业大学 +3 美美女士 2026-04-09 3/150 2026-04-10 10:31 by liuhuiying09
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 13/650 2026-04-10 10:27 by liuhuiying09
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭