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忧游鸟

铜虫 (小有名气)

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[求助] 求助酶的功能基因中如何根据片段基因得到全段序列~急

想得到一个纯菌种的酶的功能基因，现在已设计引物得到其片段基因，如何根据片段基因得到表达这个酶的全段基因。看到文献说有根据片段基因设计反向引物测序，反向测序是不是会测出很长的序列？还是直接做克隆？但是现在又没有全段的相关引物。还有说纯化这个酶直接氨基酸测定其N端氨基酸序列（好像有什么ABI Procise protein sequencer）也可以么？

重金悬赏求助啊

[ Last edited by 忧游鸟 on 2011-6-13 at 10:19 ]

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1楼2011-06-13 10:18:01

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quietorange

铁虫 (小有名气)

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专业: 环境微生物学

基于PCR的genome walking，原理跟上面有同学说的方法类似，大致说来就是提总DNA用平末端酶酶切，然后和人工合成的接头DNA连接作为模板，根据你已经克隆到的那一段设计一端的引物，根据接头设计另一端的引物，PCR。缺点是不一定一次能获得全长。

8楼2011-06-17 01:16:44

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