应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 酶的功能基因中如何根据片段基因得到全段序列~急
51/1返回列表
查看: 1811  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

忧游鸟

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助 酶的功能基因中如何根据片段基因得到全段序列~急

想得到一个纯菌种的酶的功能基因，现在已设计引物得到其片段基因，如何根据片段基因得到表达这个酶的全段基因。看到文献说有根据片段基因设计反向引物测序，反向测序是不是会测出很长的序列？还是直接做克隆？但是现在又没有全段的相关引物。还有说纯化这个酶直接氨基酸测定其N端氨基酸序列（好像有什么ABI Procise protein sequencer）也可以么？

重金悬赏求助啊

[ Last edited by 忧游鸟 on 2011-6-13 at 10:19 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-13 10:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

quietorange

铁虫 (小有名气)
基于PCR的genome walking，原理跟上面有同学说的方法类似，大致说来就是提总DNA用平末端酶酶切，然后和人工合成的接头DNA连接作为模板，根据你已经克隆到的那一段设计一端的引物，根据接头设计另一端的引物，PCR。缺点是不一定一次能获得全长。
赞一下 回复此楼
8楼2011-06-17 01:16:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
忧游鸟(金币+5): 2011-06-13 11:13:21
西瓜(金币+5, EPI+1): 不愧是专家噢！ 2011-06-13 23:48:50
你说的两个方法都可以的。测定N端氨基酸序前要分离纯化，要求蛋白浓度较高，时间也长。你既然已经得到片段基因，也可以通过RACE(rapid-amplification ofcDNA ends)技术得到全段基因。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-13 10:52:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
忧游鸟(金币+15): 5 2011-06-13 11:13:26
西瓜(金币+3): 欢迎新虫交流 2011-06-13 23:49:03
引用回帖:
Originally posted by 忧游鸟 at 2011-06-13 10:18:01:
想得到一个纯菌种的酶的功能基因，现在已设计引物得到其片段基因，如何根据片段基因得到表达这个酶的全段基因。看到文献说有根据片段基因设计反向引物测序，反向测序是不是会测出很长的序列？还是直接做克隆？但是 ...

根据片段基因设计引物做RACE，分别得到3’端和5’端序列，最后序列拼接得到全长ｃＤＮＡ序列。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-13 10:53:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忧游鸟

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-13 10:52:49:
你说的两个方法都可以的。测定N端氨基酸序前要分离纯化，要求蛋白浓度较高，时间也长。你既然已经得到片段基因，也可以通过RACE(rapid-amplification ofcDNA ends)技术得到全段基因。

这个RACE 是不是要提RNA再反转录得到cDNA啊，难度是不是很大？是不是也根据得到的片段基因上设计反向引物呢  具体不是学分子生物的 希望你能详细解说一下 谢谢
赞一下 回复此楼
4楼2011-06-13 11:12:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕，求调剂 6+3 糖葫芦888ll 2026-03-22 7/350 2026-03-24 17:11 by hello七七
[考研] 086003食品工程求调剂 +4 淼淼111 2026-03-24 4/200 2026-03-24 11:53 by 544594351
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料，材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 7/350 2026-03-24 11:23 by 种大树
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 284求调剂 +10 Zhao anqi 2026-03-22 10/500 2026-03-24 00:08 by Equinoxhua
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +7 vv迷 2026-03-22 7/350 2026-03-23 23:44 by Txy@872106
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +5 niko- 2026-03-22 5/250 2026-03-23 22:01 by fuyu_
[考研] 0703化学求调剂 +4 奶油草莓. 2026-03-22 5/250 2026-03-23 19:37 by pswait
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +3 Promise-jyl 2026-03-23 3/150 2026-03-23 13:43 by wangkm
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +8 tcxiaoxx 2026-03-20 9/450 2026-03-23 12:16 by tcxiaoxx
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 考研调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭