24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1821  |  回复: 7
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

忧游鸟

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助 酶的功能基因中如何根据片段基因得到全段序列~急

想得到一个纯菌种的酶的功能基因,现在已设计引物得到其片段基因,如何根据片段基因得到表达这个酶的全段基因。看到文献说有根据片段基因设计反向引物测序,反向测序是不是会测出很长的序列?还是直接做克隆?但是现在又没有全段的相关引物。还有说纯化这个酶直接氨基酸测定其N端氨基酸序列(好像有什么ABI Procise protein sequencer)也可以么?

重金悬赏求助啊

[ Last edited by 忧游鸟 on 2011-6-13 at 10:19 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good!楼主可以先搜索下RACE基础知识来学习先。 2011-06-13 23:49:41
引用回帖:
Originally posted by 忧游鸟 at 2011-06-13 11:15:36:
设计引物也是反向设计引物么?

一端引物是你得到片段测序出来的,另外一端引物是接头引物或者PolyA引物,具体要看。先去把RACE的原理和流程看看,然后整理出个思路来。
6楼2011-06-13 11:35:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
忧游鸟(金币+5): 2011-06-13 11:13:21
西瓜(金币+5, EPI+1): 不愧是专家噢! 2011-06-13 23:48:50
你说的两个方法都可以的。测定N端氨基酸序前要分离纯化,要求蛋白浓度较高,时间也长。你既然已经得到片段基因,也可以通过RACE(rapid-amplification ofcDNA ends)技术得到全段基因。
2楼2011-06-13 10:52:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
忧游鸟(金币+15): 5 2011-06-13 11:13:26
西瓜(金币+3): 欢迎新虫交流 2011-06-13 23:49:03
引用回帖:
Originally posted by 忧游鸟 at 2011-06-13 10:18:01:
想得到一个纯菌种的酶的功能基因,现在已设计引物得到其片段基因,如何根据片段基因得到表达这个酶的全段基因。看到文献说有根据片段基因设计反向引物测序,反向测序是不是会测出很长的序列?还是直接做克隆?但是 ...

根据片段基因设计引物做RACE,分别得到3’端和5’端序列,最后序列拼接得到全长cDNA序列。
3楼2011-06-13 10:53:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忧游鸟

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-13 10:52:49:
你说的两个方法都可以的。测定N端氨基酸序前要分离纯化,要求蛋白浓度较高,时间也长。你既然已经得到片段基因,也可以通过RACE(rapid-amplification ofcDNA ends)技术得到全段基因。

这个RACE 是不是要提RNA再反转录得到cDNA啊,难度是不是很大?是不是也根据得到的片段基因上设计反向引物呢  具体不是学分子生物的 希望你能详细解说一下 谢谢
4楼2011-06-13 11:12:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +5 邱gl 2026-03-27 5/250 2026-03-27 11:53 by zyc晨晨晨
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 275求调剂 +4 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 4/200 2026-03-27 11:08 by wangjy2002
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +6 kongweilin 2026-03-26 8/400 2026-03-27 10:18 by FF_16
[考研] 359求调剂 +4 王了个楠 2026-03-25 4/200 2026-03-27 08:43 by 不吃魚的貓
[考研] 316求调剂 +5 江辞666 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:08 by hypershenger
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料,材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见