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为什么RNA总是降解！
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要做转录组分析，需要制备样品送到芯片分析公司让他们提取RNA做转录组分析，但是样品我准备2次了，邮寄到他们那边提出RNA后给出质检结果都是降解了，郁闷！ 我的样品制备过程如下： （1）在设计的时间点取样 （2）预冷水中超声清洗90s（我做的是吸附固定化，一般都是超声清洗下来，整个反应体系6ml连小瓶子都放进去了） （3）取1ml菌液于1.5ml离心管中12000rpm离心1min,弃上清后再加入1ml离心2min。 （4）弃上清后加入1.2ml Trizol,用枪悬浮充分。 （5）液氮速冻2min. （6）立即-80保存。 （7）2天后带干冰邮寄到公司。 （8）他们负责RNA的提取。 （9）5天后给出质检结果全部样品降解（RIN在4.5-6之间；28s/18s在0.1-0.4之间） 前后两次了发来质检结果都是降解，不知道到底是我的样品准备过程有问题还是其他问题？ |
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7楼2012-10-25 21:11:02
zhwenxing
木虫 (著名写手)
尛森蟲
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-10-25 12:13:42
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-26 08:06:33
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1、细菌RNA的抽提并不困难，可以跟公司谈一下，你准备洗脱下来的活菌，除了超声破碎还有其他办法吗？ 2、尽量用对数生长期后期的菌液。 3、超声破碎细菌之后，若不立刻处理，RNA严重降解，这点我试验过好几次，Rnase确实管用。 4、还是推荐送活菌由公司来处理比较合适。当然了，公司把你的样品如何存放的？若加入了足够提取剂，一般4℃一周问题不大。 5、把你处理后的样品自己小提一下，也同时提取一份活菌的，验证看看。 祝福好运哈！ |
3楼2012-10-25 11:01:25
4楼2012-10-25 12:16:06
weigh1111
铁杆木虫 (正式写手)
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6楼2012-10-25 20:10:12
10