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禁锢挽歌

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量的图，求解释啊

如图：内参的曲线是弯的，平一点的是目标基因的曲线，以前做定量从来没有出现过这种情况，目标基因的曲线是这样的，而且没有CT值，这个只是一个样品的图，其他的基本和这差不多，我也不大清楚是什么原因，后来想了下肯能是引物的问题，引物反复冻融有10几次了，内参的引物基本没有冻融。有谁知道这是什么情况,求解释啊。

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1楼 2013-04-24 09:04:51
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
禁锢挽歌: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-04-24 10:10:13
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-24 19:34:05
我觉得是引物没有和模板结合，内参的是好的，所以模板应该是没有问题的，应该还是引物的问题的吧。。。其他的想不出是什么原因了。。。
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keepon
2楼2013-04-24 09:53:51
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普通回帖

禁锢挽歌

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2013-04-24 09:53:51
我觉得是引物没有和模板结合，内参的是好的，所以模板应该是没有问题的，应该还是引物的问题的吧。。。其他的想不出是什么原因了。。。

我也这么认为 但是我跑了电泳，还是有产物的
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3楼2013-04-24 10:10:59
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
产物图片和做的具体步骤发过来看看啊
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4楼2013-04-24 10:23:56
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lloveyr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是目标基因太少，扩增不出来？
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5楼2013-04-24 10:26:57
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dragon6618

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-24 19:34:20
综合我前几次做的经验：
下面那个线有几种情况
1. 引物降解问题 和漏点样
2. 目的基因无表达或表达非常低，建议使用PCR 跑个胶看看
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6楼2013-04-24 11:37:56
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禁锢挽歌

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-04-24 10:23:56
产物图片和做的具体步骤发过来看看啊

这是跑的胶 marker没跑好 前面7个亮的是目标基因的，后面的是内参的。我加样的是陪的预混液，陪了2种预混液，一种是sybr rox 模板的预混液，还有引物 和水的预混液，A1到A8第一种预混液都加的是一样的，A1到A4  A5到A8只有引物那个预混液不一样，所以我猜测是引物的问题，目标基因的引物冻融10几次，不知道是不是有影响。

zongchao2013.4.23.jpg
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7楼2013-04-24 15:02:32
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禁锢挽歌

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lloveyr at 2013-04-24 10:26:57
会不会是目标基因太少，扩增不出来？

这个应该不会，之前做的实验完全一样，模板的浓度一样
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8楼2013-04-24 15:03:43
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禁锢挽歌

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dragon6618 at 2013-04-24 11:37:56
综合我前几次做的经验：
下面那个线有几种情况
1. 引物降解问题 和漏点样
2. 目的基因无表达或表达非常低，建议使用PCR 跑个胶看看

楼点样肯定不会，我觉得是引物的问题，胶也跑了，目的基因的表达比内参还高.
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9楼2013-04-24 15:05:09
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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
禁锢挽歌(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-06 16:03:33
感觉像没有扩增
记得有一次我的是其中两个孔忘记加模板还是引物了 出现过一次这样的情况

我觉得是引物的问题 引物也可以分装一下 不要老是冻融
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10楼2013-04-26 08:37:31
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