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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】革兰氏阳性菌PCR问题
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】革兰氏阳性菌PCR问题 已有7人参与

我想用革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌的菌液直接作为模板进行pcr反应。我先把金黄色葡萄球菌的菌液离心后，加无菌水混匀，然后沸水浴，迅速放-20度冰箱，离心后的上清液作为模板进行pcr，但是电泳没有条带。请问是什么原因，对于革兰氏阳性菌还有什么其他的好方法做pcr吗？
另外，如果先抽提出金黄色葡萄球菌的DNA，以其DNA作为模板，再进行PCR，在抽提DNA的过程中会不会因有杂菌DNA的污染而干扰PCR反应啊？
多谢指教！

[ Last edited by lilirong2009 on 2011-3-3 at 19:43 ]
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1楼 2011-03-03 19:31:56
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
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amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-03 20:55:36
引用回帖:
Originally posted by lilirong2009 at 2011-03-03 19:31:56:
我想用革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌的菌液直接作为模板进行pcr反应。我先把金黄色葡萄球菌的菌液离心后，加无菌水混匀，然后沸水浴，迅速放-20度冰箱，离心后的上清液作为模板进行pcr，但是电泳没有条带。请问是什 ...

阳性菌比较难破壁，再说冻时也最好用液氮，最低也-80吧。


不会有很大影响的，毕竟你的菌占优势嘛，那么多的菌，掉进去几个杂菌也不会影响的。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-03-03 20:16:16
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匿名

用户注销 (小有名气)
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3楼2011-03-03 21:55:11
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luquan5918

至尊木虫 (著名写手)
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rainwander(金币+1): 鼓励分享经验~~~ 2011-03-04 17:57:13
我做过革兰氏阳性菌中乳酸菌的PCR，提取DNA作为模板，结果还可以，为发现杂菌的影响。
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4楼2011-03-04 10:31:51
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j2

木虫 (正式写手)
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rainwander(金币+1): 鼓励分享经验~~~ 2011-03-04 17:57:31
沸水煮了多久？我们实验室的煮15分钟，可以跑出来耶
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
5楼2011-03-04 15:09:54
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yesucao

木虫 (正式写手)
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rainwander(金币+2): 鼓励新虫~~~ 2011-03-04 17:57:51
我直接提取DNA再进行PCR的，用的是-80度反复冻融法，效果不错。
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6楼2011-03-04 17:08:22
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
阳性菌破壁不易，你可以先用溶菌酶消化一会，再煮个十分钟，再跑PCR，应该可以了哇～
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7楼2011-03-10 18:49:30
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fwks3518

木虫 (正式写手)
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阳性菌难破壁，加溶菌酶半小时，再多煮会儿
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8楼2011-03-10 19:26:19
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