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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于细菌基因组DNA提取的问题？
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tiny1979

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于细菌基因组DNA提取的问题？

请问各位大虾，我现在要做革兰氏阳性菌基因组DNA的提取，需要加溶菌酶和RNA酶。如果用SDS法，我能否将溶菌酶、RNA酶和SDS裂解液一起加，然后60度水浴1小时，这样能否既裂解细胞壁、蛋白质，又把RNA去掉？然后第二步用酚氯仿抽提，其它步骤同经典SDS法。
DNA用于PCR的。
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1楼 2011-03-17 11:43:27
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2): 鼓励回答 2011-03-17 13:12:01
tiny1979(金币+2): 2011-03-17 14:36:20
不可以一起加，需要将溶菌酶先加，SDS是去垢剂，会使溶菌酶失活，一起加的话溶菌酶起不到作用。
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2楼2011-03-17 11:51:24
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天使托

专家顾问 (职业作家)
学习楼上了。。。。
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3楼2011-03-17 11:54:07
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tiny1979

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-17 11:51:24:
不可以一起加，需要将溶菌酶先加，SDS是去垢剂，会使溶菌酶失活，一起加的话溶菌酶起不到作用。

谢谢！
那是否先加溶菌酶37度水浴1h，离心取上清。然后再加SDS裂解液，是否需要60度水浴？
RNA酶最后加在DNA溶液中，这样是否会影响PCR反应？
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4楼2011-03-17 14:32:11
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by tiny1979 at 2011-03-17 14:32:11:
谢谢！
那是否先加溶菌酶37度水浴1h，离心取上清。然后再加SDS裂解液，是否需要60度水浴？
RNA酶最后加在DNA溶液中，这样是否会影响PCR反应？

需要60度水浴的，呵呵。RNA很容易降解，不会对后续的DNA操作造成任何影响。
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5楼2011-03-17 15:27:42
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tiny1979

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-17 15:27:42:
需要60度水浴的，呵呵。RNA很容易降解，不会对后续的DNA操作造成任何影响。

噢，明白了。可那不是总共要水浴1-2小时，温度不同而已？呵呵，我就想简化一下
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6楼2011-03-18 08:55:22
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