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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】转化时平板涂布后要放多久?
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oyanxuelai

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】转化时平板涂布后要放多久? 已有12人参与

转化时平板涂布后要放多久?
转化时,取200ul转化后的菌液在平板上涂布,要等五分钟还是十分钟?菌液干了,会不会影响转化后细菌的生长?我做转化后,不长菌,不知道是什么原因,请各位虫友们指点迷津!非常感谢!
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1楼 2010-08-19 10:47:47
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bunny0512

银虫 (小有名气)
★ ★
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看天(金币+1):谢谢交流 2010-08-19 16:05:27
化转效率低的话,可以考虑一下电转.另外化转的时候,热激后,一定要注意避免震荡,我通常就轻轻的放在冰上不移动它了.
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在哪里~在哪里见过你~
10楼2010-08-19 12:39:11
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普通回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
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看天(金币+1):鼓励回答 2010-08-19 16:04:33
200ul不太容易涂干吧，可以4900ｒ/min离心5min后倒掉一部分上清，吹打混匀后涂板，涂完后可立刻放到培养箱，板子干了不影响结果
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2010-08-19 10:59:55
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★
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要看对照实验的…………
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金币是赌出来的
3楼2010-08-19 11:01:48
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oyanxuelai

银虫 (小有名气)
非常感谢!我那菌液是,5ulPCR产物酶切后的+100ul感受态细菌,进行转化后,再加600ul无抗生素的液态培养基.正对照长得很多,负对照没有长,就是实验组的不长
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4楼2010-08-19 11:07:34
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大变化

新虫 (初入文坛)

【求助/交流】转化时平板涂布后要放多久?

★ ★ ★ ★
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看天(金币+3):鼓励新人交流 2010-08-19 16:04:51
要看你用的平板。要是用的平板已经配了很久了，你涂得量也不多，涂完菌，就会干，就可倒置培养！要是最近一两天才配的，可能就要等等了，要是涂完后，一直不干的话，就正放平板，过夜培养，影响也不会很大！
转化后,不长菌，这个原因就多了，得看你转化的是什么，要是连接片段转化的话，没长菌，可能是没连接上。也许是平板抗性不对，或许是做转化过程中出了问题！
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我期望自己能有一个大的转变！！！！
5楼2010-08-19 11:07:51
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大变化

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by oyanxuelai at 2010-08-19 11:07:34:
非常感谢!我那菌液是,5ulPCR产物酶切后的+100ul感受态细菌,进行转化后,再加600ul无抗生素的液态培养基.正对照长得很多,负对照没有长,就是实验组的不长

酶切过后，就转化？酶切过后，只是片段，得先同一个载体质粒连接，再转化！
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我期望自己能有一个大的转变！！！！
6楼2010-08-19 11:12:18
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by oyanxuelai at 2010-08-19 11:07:34:
非常感谢!我那菌液是,5ulPCR产物酶切后的+100ul感受态细菌,进行转化后,再加600ul无抗生素的液态培养基.正对照长得很多,负对照没有长,就是实验组的不长

你拿酶切后的pcr片段做转化当然不会长！先连接目标载体才可以！
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
7楼2010-08-19 11:20:26
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oyanxuelai

银虫 (小有名气)
哦,呵呵,那5ul 是PCR产物经过酶切后胶回收与经过酶切的质粒连接的产物,只取出5ul做转化
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8楼2010-08-19 11:34:17
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
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看天(金币+1):鼓励 2010-08-19 16:05:16
使用前放在超净台吹一会，就容易涂干了。

在冰箱里放久了的平板也会好涂干，真是涂不干也不会有很大影响。

长不出来克隆不是干不干所能影响的，查找其他原因。
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9楼2010-08-19 12:19:10
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